临床经验
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世界华人消化杂志. 2013-12-28; 21(36): 4146-4152
Published online 2013-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i36.4146
基于iTRAQ结合2D-LC-MS/MS筛选胃癌血清差异表达蛋白
韦春回, 赖铭裕, 莫喜晶
韦春回, 赖铭裕, 广西医科大学第一附属医院老年消化内科 广西壮族自治区南宁市 530021
莫喜晶, 广西中医药大学第一附属医院仁爱分院 广西壮族自治区南宁市 530001
韦春回, 硕士, 住院医师, 主要从事胃癌发病机制方面的研究.
基金项目: 广西科学研究与技术开发计划基金资助项目, No. 桂科攻1140003A-13.
作者贡献分布: 韦春回与赖铭裕对此文所作贡献均等; 此课题由赖铭裕与韦春回设计; 研究过程由韦春回、赖铭裕与莫喜晶操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由赖铭裕提供; 数据分析由韦春回与莫喜晶完成; 本论文撰写由韦春回完成.
通讯作者: 赖铭裕, 教授, 主任医师, 530021, 广西壮族自治区南宁市双拥路6号, 广西医科大学第一附属医院老年消化内科. laimingyu2005103@yahoo.com.cn
电话: 0771-5356620
收稿日期: 2013-09-21
修回日期: 2013-10-23
接受日期: 2013-11-06
在线出版日期: 2013-12-28
Abstract

目的: 筛选胃癌血清差异表达蛋白, 寻找胃癌血清标志物.

方法: 采集胃癌患者血清和正常对照人群血清各45例, 所有血清样本去除高丰度血清蛋白质后, 采用相对和绝对定量同位素标志(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术联合二维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chromatography/tandem mass spectrometry, 2D-LC-MS/MS)分析和鉴定两组间的差异表达蛋白; 采用生物信息学对差异蛋白进行分析; 用Western blot对蛋白组中的代表性血清差异表达蛋白进行表达验证.

结果: iTRAQ标记联合2D-LC-MS/MS分析一共鉴定出10540条独特肽段, 对应199个非冗余蛋白, 其中符合条件的差异蛋白17个, 其中12个蛋白在胃癌患者中表达上调, 5个蛋白在胃癌患者中表达下调. 17种差异表达蛋白参与10种生物学过程、9种分子作用和2种细胞组分, 涉及的5个生物代谢途径. Western blot结果显示, 与正常对照人群相比, 代表性差异表达蛋白ITIH4在胃癌患者血清中表达量上调, 差异具有统计学意义(1.7517±0.247 vs 1±0, P<0.05).

结论: ITIH4可能是诊断胃癌新的潜在生物标志物.

Keywords: 胃癌; iTRAQ; Western blot; 标志物; ITIH4

核心提示: 胃癌(gastric cancer, GC)是严重危害人类健康的常见病和多发病, 可见早期诊断的意义尤为重要. 本研究通过iTRAQ结合2D-LC-MS/MS筛选GC血清差异表达蛋白并通过Western blot验证, 初步筛选得到ITIH4为GC差异表达蛋白, ITIH4可能是诊断GC的潜在生物标志物. 表明该技术用于GC生物标志物的血清蛋白质组学研究具有良好的前景.