基础研究
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世界华人消化杂志. 2013-10-28; 21(30): 3190-3197
Published online 2013-10-28. doi: 10.11569/wcjd.v21.i30.3190
腺病毒携带IL-12治疗肝癌细胞株HepG2的体外实验
崔清昱, 秦万民, 张炳远, 刘世海, 孙传东
崔清昱, 秦万民, 张炳远, 孙传东, 青岛大学附属医院普外二科 山东省青岛市 266071
刘世海, 青岛大学中心实验室 山东省青岛市 266071
崔清昱, 在读硕士, 主要从事胃肠肝胆外科的相关研究.
基金项目: 山东省2012科学技术发展计划基金资助项目, No. 2012G0021845; 山东省自然科学基金资助项目, No. 2011ZRB01588; 青岛市科技计划基础研究基金资助项目, No. 11-2-4-2-(28)-jch.
作者贡献分布: 崔清昱与孙传东对此文所作贡献均等; 此课题由崔清昱、秦万民及孙传东设计; 研究过程由崔清昱与秦万民操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由刘世海提供; 数据分析由崔清昱完成; 张炳元参与课题的设计与指导; 论文写作由崔清昱与孙传东完成.
通讯作者: 孙传东, 副主任医师, 266071, 山东省青岛市市南区江苏路19号, 青岛大学附属医院普外二科. sunchuandong@hotmail.com
收稿日期: 2013-06-11
修回日期: 2013-07-10
接受日期: 2013-09-17
在线出版日期: 2013-10-28
Abstract

目的: 探讨腺病毒介导的白介素12(interleukin-12, IL-12)基因(AdvIL-12)转染能否在体外诱导出更强的抗(hepatocellular carcinoma, HCC)免疫效应.

方法: 在体外, 用AdvIL-12转染HepG2作为实验组, 以Adv-绿色荧光蛋自(green fluorescent protein, GFP)转染的HepG2和未转染的HepG2作为对照组进行培养. 用划痕试验检测载有IL-12的腺病毒对HepG2细胞的迁移能力的影响; 结晶紫法检测对HepG2的生长能力的抑制和杀伤作用; MTT检测对HepG2细胞增殖能力的抑制作用的影响; TUNEL法检测对HepG2细胞的凋亡效应的影响.

结果: 正常生长的HepG2单层贴壁生长, 生长旺盛, 镜下观察为梭形, 胞浆均质透明, 折光性好, 胞间紧密连接, 核质均匀, 核仁清晰可见. 实验组AdvIL-12作用24 h后HepG2细胞迁移距离明显受到抑制, 且随浓度增大, HepG2细胞向划痕区移动的距离越来越小, 细胞数量越少, 划痕越宽. 实验组AdvIL-12结晶紫染色深度随浓度梯度减少而逐渐加深. 取10 μL AdvIL-12时对HepG2细胞杀伤效果最为明显. 酶标仪检测AdvIL-12组、Adv-GFP组和HepG2空白对照组分别培养24、48、72 h后的A值(F1 = 95.7, F2 = 103.6, F3 = 165.8, P<0.01)与对照组相比有统计学意义. 光镜下可见凋亡细胞明显固缩, 体积变小, 胞质致密, 核浓缩甚至消失, 形成凋亡小体. 实验组AdvIL-12组凋亡细胞数量明显多于对照组Adv-GFP组.

结论: 转染AdvIL-12的HepG2细胞能有效抑制HepG2细胞的生长, 增殖和迁移能力, 效果随浓度增大而增强, 并能够促进HepG2细胞的凋亡效应, 从而在体外达到明显的肿瘤抑制作用.

Keywords: 腺病毒; 白介素-12; 肝癌; Tunel

核心提示: 本文采用最新腺病毒作为载体携带白介素12(interleukin-12, IL-12)在体外研究对肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的抗肿瘤效果. 通过对HCC细胞株HepG2的生长、增殖、迁移以及凋亡的影响得出腺病毒能够良好的携带IL-12并通过免疫机制有效的抑制HCC细胞的生长. 在实际应用中, 可以通过开发相关的免疫疫苗来达到治疗目的.