研究快报
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世界华人消化杂志. 2013-07-08; 21(19): 1859-1865
Published online 2013-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v21.i19.1859
siRNA沉默KAP-1表达抑制胰腺癌细胞PANC-1的侵袭能力
江建新, 詹磊, 黄洋, 何燕浙, 孙诚谊
江建新, 詹磊, 黄洋, 何燕浙, 孙诚谊, 贵阳医学院附属医院肝胆外科 贵州省贵阳市 550001
江建新, 副主任医师, 主要从事肝胆胰脾疾病的基础与临床研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 81160311; 贵州省科教青年英才培养工程基金资助项目, No. 黔省专合字[2012]177号; 贵州省科技厅2011年度社会攻关计划基金资助项目, No. 黔科合SY字[2011] 3007; 贵州省肝胰疾病研究科技创新人才团队基金资助项目, No. 黔科合人才团队[2010]4010.
作者贡献分布: 主要实验设计、资料收集分析、统计及文章撰写由江建新完成; 文章修改和审阅由孙诚谊完成; 样本处理、实验操作由詹磊、黄洋及何燕浙完成.
通讯作者: 孙诚谊, 教授, 550001, 贵州省贵阳市贵医街28号, 贵阳医学院附属医院肝胆外科. chengyisun@medmail.com.cn
电话: 0851-6773083
收稿日期: 2013-02-18
修回日期: 2013-05-28
接受日期: 2013-06-05
在线出版日期: 2013-07-08
Abstract

目的: 观察siRNA沉默KAP-1基因表达对人胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力的影响, 探求该基因作为治疗靶点的可行性.

方法: 针对KAP-1基因设计5条siRNA, 构建真核表达载体, 转染293T细胞筛选RNAi有效靶点, 包装成重组慢病毒Lv-siRNA-KAP-1, 感染胰腺癌细胞PANC-1成功后RT-qPCR检测RNA干扰沉默效果, Transwell小室检测细胞侵袭能力. Western blot检测波形蛋白表达.

结果: 转染48 h后, 5条siRNA能显著抑制KAP-1的蛋白表达; 其中最有效的1条siRNA包装成重组慢病毒Lv-siRNA-KAP-1, 感染PANC-1细胞侵袭能力明显受到抑制; 感染后细胞侵袭数目(97.3±25.6)较空白对照组(253.3±20.6)与阴性对照组(213.2±19.4)明显减少, 差异显著(P<0.05); 感染后PANC-1细胞的波形蛋白表达下调.

结论: Lv-siRNA-KAP-1能显著抑制PANC-1细胞KAP-1的表达, 抑制PANC-1细胞侵袭能力及波形蛋白表达, KAP-1基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点.

Keywords: 胰腺癌; KAP-1; 小干扰RNA; 侵袭

核心提示: KAP-1在胰腺癌细胞中高表达, 其表达与胰腺癌细胞的分化相关, KAP-1作为一种转录中介因子, 可能通过调控其他蛋白来影响胰腺癌的生物学行为. 该研究成功构建KAP-1的RNAi重组慢病毒表达系统, 感染PANC-1细胞能抑制其侵袭能力; 其机制之一是下调与侵袭转移相关的波形蛋白表达, KAP-1有可能成为新的胰腺癌治疗靶点.