基础研究
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世界华人消化杂志. 2012-10-28; 20(30): 2895-2901
Published online 2012-10-28. doi: 10.11569/wcjd.v20.i30.2895
siRNA沉默RPL31表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用
李朝东, 戈梅, 罗敏玉, 陈代杰
李朝东, 陈代杰, 华东理工大学生物工程学院 上海市 200237
戈梅, 上海交通大学药学院 上海市 200240
戈梅, 罗敏玉, 上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司 上海市 201203
李朝东, 在读博士, 主要从事胰腺癌基因治疗的研究.
基金项目: 重大新药创制-微生物药物技术创新与新药创制产学研联盟基金资助项目, No. 2010ZX09401-403.
作者贡献分布: 此课题由陈代杰与戈梅设计; 研究过程及本文撰写由李朝东操作完成; 数据分析由李朝东完成; 罗敏玉提供了实验指导和分析工具; 陈代杰与戈梅审阅论文、指导论文修改.
通讯作者: 陈代杰, 研究员, 博士生导师, 200237, 上海市梅陇路130号, 华东理工大学生物工程学院. hccbred@gmail.com
电话: 021-34207020
收稿日期: 2012-08-09
修回日期: 2012-09-05
接受日期: 2012-09-25
在线出版日期: 2012-10-28
Abstract

目的: 观察siRNA沉默核糖体蛋白L31(ribosomal protein L31, RPL31)基因表达对人胰腺癌PANC-1细胞的影响.

方法: 针对RPL31基因设计了3条siRNA, 使用脂质体LipofectamineTM2000转染人胰腺癌PANC-1细胞, 同时设立空白对照组和阴性对照组, 转染成功后通过实时定量PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测RNA干扰沉默RPL31基因的效果, 四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞周期分布, Transwell小室检测细胞迁移, ELISA检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达.

结果: 转染48 h后, 3条siRNA能显著抑制RPL31基因mRNA和蛋白的表达; MTT结果显示, PANC-1细胞增殖明显受到抑制; 细胞周期分布中G0/G1期明显增加、S期减少(G0/G1: 59.85%±5.47% vs 45.71%±3.44%; S: 28.63%±4.52% vs 45.13%±2.64%, 均P<0.05); 转染后细胞迁移数目(178.6个±30.3个)较空白对照组(470.5个±22.8个)与阴性对照组(474.2个±20.4个)明显减少, 差异显著(P<0.05); 转染后PANC-1细胞的VEGF表达量也明显减少[1563.45 pg/(106 cell • 24 h)±24.95 pg/(106 cell • 24 h) vs 2804.6 pg/(106 cell • 24 h)±40.46 pg/(106 cell•24 h), 2791.5 pg/(106 cell • 24 h)±44.77 pg/(106 cell•24 h)].

结论: RPL31 siRNA能明显抑制PANC-1细胞RPL31的表达, 抑制细胞增殖, 降低细胞迁移及VEGF表达, RPL31基因有可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点.

Keywords: 胰腺癌; 核糖体蛋白L31; 小干扰RNA; 细胞增殖; 细胞迁移