修回日期: 2010-12-27
接受日期: 2011-01-06
在线出版日期: 2011-02-08
目的: 研究白花丹醌对瘦素(Leptin)刺激体外培养人肝星状细胞株HSC-LX2凋亡及相关蛋白表达的影响, 以探讨其抗肝纤维化作用的机制.
方法: 体外培养HSC-LX2, 将其分为以下几组: 空白对照组、Leptin对照组、秋水仙碱组、2 、8、16 μmol/L 白花丹醌组. 瘦素刺激24 h, 药物与细胞共孵育24 h后, 应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测细胞凋亡, 透射电镜观察HSC-LX2凋亡形态学变化, 免疫组织化学法检测HSC-LX2凋亡基因p53、Bax、Bcl-2的蛋白表达.
结果: 细胞流式术结果显示, 白花丹醌作用HSC-LX2 24 h, HSC凋亡率明显增加, 白花丹醌8、16 μmol/L组和秋水仙碱组HSC凋亡率均显著高于空白对照组和Leptin对照组(5.21%±0.41%, 8.10%±0.63%, 10.1%±1.08% vs 1.40%±0.13%, 2.85%±0.21%, 均P<0.01). 透射电镜结果, 空白对照组细胞形态清晰, 细胞膜、核膜完整, 胞质内细胞器清晰, 染色质均匀, 细胞表面微绒毛; 药物组可见少量坏死细胞和许多不同程度的凋亡细胞, 体积变小, 核膜消失, 胞质浓缩, 胞质内出现大量空泡, 细胞核染色质固缩, 可见核碎裂, 细胞表面微绒毛消失. 免疫组织化学结果显示, 受Leptin刺激后HSC-LX2胞质内表达少量的Bax、Bcl-2、P53, 可见少量的棕黄色颗粒, 经白花丹醌2、8、16 μmol/L干预后, HSC-LX2促凋亡基因Bax、P53蛋白表达明显升高, 抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达显著降低, 与Leptin刺激组相比, 差异均有统计学意义(Bax: 85.24±1.08, 86.35±1.12, 91.13±1.13 vs 56.63±0.94; P53: 25.32±0.6, 38.14±0.71, 41.19±0.72 vs 19.25±0.46; Bcl-2: 32.12±0.43, 27.71±0.38, 21.46±0.46 vs 44.51±0.56, P<0.05或0.01).
结论: 白花丹醌能够促进活化的HSC-LX2凋亡, 其促HSC-LX2凋亡机制可能与上调P53、Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白有关.