研究快报
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世界华人消化杂志. 2011-09-08; 19(25): 2660-2663
Published online 2011-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v19.i25.2660
表达大鼠IL-2、B7-1基因CBRH7919细胞的建立
史瑶平, 郭燕, 李鹤平, 沈俊杰, 杨建勇
史瑶平, 郭燕, 李鹤平, 沈俊杰, 杨建勇, 中山大学附属第一医院放射科 广东省广州市 510080
基金项目: 国家自然科学基金面上资助项目, No. 30600156, No. 81071247, No. 30870692.
作者贡献分布: 史瑶平与杨建勇对此文所作贡献均等; 此项研究经费由杨建勇与李鹤平提供; 课题由杨建勇、郭燕、李鹤平及史瑶平设计; 研究过程由史瑶平与沈俊杰操作完成; 数据分析及论文撰写由史瑶平完成; 郭燕、李鹤平及杨建勇提供指导.
通讯作者: 杨建勇, 教授, 510080, 广东省广州市, 中山大学附属第一医院放射科. cjr.yangjianyong@vip.163.com
收稿日期: 2011-04-27
修回日期: 2011-06-21
接受日期: 2011-06-28
在线出版日期: 2011-09-08
Abstract

目的: 研究携带大鼠IL-2、B7-1目的基因的CBRH7919细胞(即CBRH7919/IL-2/B7-1)体外表达目的基因的能力.

方法: RT-PCR扩增Wistar大鼠IL-2、B7-1目的基因, 分别克隆至重组逆转录病毒载体pBaBe-puro及pMSCV-neo, 构建逆转录病毒载体pBaBe-puro-IL-2及pMSCV-neo-B7-1, 重组质粒转染病毒包装细胞293FT(胚胎肾细胞), 产生病毒后感染CBRH-7919, 用抗生素puro/G418筛选出细胞抗性克隆, 并用RT-QPCR、Western blot及ELISA实验证实抗性细胞在转录水平和蛋白水平IL-2、B7-1的表达情况.

结果: 用RT-PCR方法成功扩增了Wistar大鼠IL-2及B7-1目的基因, 经测序结果证实成功构建了pBaBe-puro- IL-2及pMSCV-neo-B7-1重组质粒. 利用该重组质粒成功构建了CBRH7919/IL-2/B7-1细胞系, 实时荧光定量PCR检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞中IL-2和B7-1基因的平均表达量分别是CBRH-7919-pmscv-neo的4.153倍和17.040倍; West blot检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞B7-1表达是无基因修饰CBRH7919的3倍; ELISA法检测结果显示CBRH-7919/IL-2/B7-1细胞IL-2表达量是无基因修饰CBRH7919的190余倍.

结论: 成功建立了稳定高效表达大鼠IL-2、B7-1的CBRH7919/IL-2/B7-1细胞系,为下一步开展研究肝癌免疫基因治疗奠定了基础.

Keywords: 白介素2; B7-1; CBRH7919; 原发性肝癌