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TNF-α体外对Caco-2细胞通透性的影响及其机制
王国丽, 何芳, 尹飞, 中南大学湘雅医院儿科 湖南省长沙市 410008
尹菁华, 中南大学医学院 湖南省长沙市 410008
毛定安, 中南大学湘雅第二医院儿科 湖南省长沙市 410011
基金项目: 中南大学大学生创新性实验计划基金资助项目, No. 081053356.
作者贡献分布: 此课题由尹飞设计; 研究过程实验操作主要由王国丽与尹菁华完成; 尹菁华、毛定安及何芳对数据分析及论文写作提供帮助.
通讯作者: 尹飞, 主任医师, 博士生导师, 410008, 湖南省长沙市, 中南大学湘雅医院儿科. yf2323@hotmail.com
电话: 0731-84327208 传真: 0731-84327922
收稿日期: 2009-12-17
修回日期: 2010-02-02
接受日期: 2010-02-09
在线出版日期: 2010-03-28
修回日期: 2010-02-02
接受日期: 2010-02-09
在线出版日期: 2010-03-28
Abstract
目的: 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞间通透性的影响及作用机制.
方法: 利用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型, 模型分为正常对照组(C组)和TNF-α预处理组(TNF-α组), TNF-α组根据预处理时间又分为3、6、12、24 h 4个亚组. 应用电阻仪测定TNF-α预处理后各组Caco-2细胞的跨上皮细胞电阻(transepithelial electrical resistance, TEER)变化; 罗丹明-鬼笔环肽直接染色观察细胞骨架改变; 同时采用荧光素酶报告基因检测NF-κB活性.
结果: TNF-α各亚组TEER均降低, 与C组比较均有显著性差异(均P<0.05), 其中TNF-α 24 h亚组TEER降低明显, 与C组及TNF-α 3、6、12 h亚组比较有显著性差异(均P<0.05); TNF-α 3、6、12 h亚组NF-κB活性增高, 与C组比较均有显著性差异(均P<0.05), 且TNF-α 12 h亚组NF-κB活性明显增高, 与C组及TNF-α 3、6、24 h亚组比较均有显著性差异(均P<0.05); 罗丹明-鬼笔环肽直接染色可见C组的F-actin沿细胞膜分布, 呈蜂巢状线性荧光, 100 μg/L TNF-α预处理后导致F-actin荧光信号减弱, 并呈锯齿状异常分布.
结论: TNF-α导致Caco-2细胞间的通透性增加, 其机制可能与NF-κB活化及F-actin重组有关.
Keywords: 肿瘤坏死因子-α; Caco-2细胞; 核因子-κB; 细胞间通透性