基础研究
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世界华人消化杂志. 2010-01-28; 18(3): 245-249
Published online 2010-01-28. doi: 10.11569/wcjd.v18.i3.245
Cdx2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
钱倩, 王晓通, 谢玉波, 李雷, 肖强
钱倩, 王晓通, 李雷, 肖强, 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科 广西壮族自治区南宁市 530021
谢玉波, 广西医科大学第一附属医院麻醉科 广西壮族自治区南宁市 530021
钱倩, 广西医科大学2007级在读硕士, 主要从事普外专业研究.
基金项目: 广西自然科学基金资助项目, No. 桂科自0832123.
作者贡献分布: 此课题由肖强与谢玉波设计; 研究过程由钱倩与王晓通操作;数据分析由钱倩、王晓通及李雷完成; 本论文写作由钱倩、谢玉波及肖强完成.
通讯作者: 肖强, 教授, 530021, 广西壮族自治区南宁市, 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科. xiaoqiang20050@yahoo.com.cn
电话: 0771-5358325 传真: 0771-5358325
收稿日期: 2009-10-31
修回日期: 2009-12-14
接受日期: 2009-12-21
在线出版日期: 2010-01-28
Abstract

目的: 构建尾型同源盒基因Cdx2 RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定.

方法: 选取Cdx2基因的19 nt特异性序列, 设计针对Cdx2的shRNA序列, 应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中, Xba I和 Not I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆, 重组病毒质粒及其3种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞, 培养48 h后, 收集细胞培养上清液, 将其浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度.

结果: 通过对pLL-Cdx2-shRNA载体进行双酶切鉴定, 证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体, DNA测序证实插入的序列正确, Cdx2基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞包装成功, 收集293T细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为5×107 TU/mL.

结论: 成功构建人Cdx2基因RNAi慢病毒载体, 为研究Cdx2对胃癌生长的影响提供了稳定感染细胞载体.

Keywords: 慢病毒载体; Cdx2; RNAi