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世界华人消化杂志. 2010-07-08; 18(19): 2038-2042
Published online 2010-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v18.i19.2038
Published online 2010-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v18.i19.2038
抑制细胞因子RhoA的表达对肝星状细胞株HSC-T6胶原分泌的影响
王波, 王艳芬, 田德安, 王天才, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30800968
作者贡献分布: 此课题由王波与王天才设计; 研究过程及数据分析由王波与王艳芬完成; 论文书写由王波与田德安完成.
通讯作者: 王天才, 教授, 主任医师, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科. tcwang@tjh.tjmu.edu.cn
电话: 027-83663611
收稿日期: 2010-04-03
修回日期: 2010-06-06
接受日期: 2010-06-22
在线出版日期: 2010-07-08
修回日期: 2010-06-06
接受日期: 2010-06-22
在线出版日期: 2010-07-08
Abstract
目的: 观察并比较两种方法抑制RhoA的表达对细胞外基质成分, 如Ⅰ型胶原、透明质酸以及层粘连蛋白合成的影响, 为肝纤维化的基因治疗寻求新的途径.
方法: 设计并合成针对RhoA相同靶点的反义寡核苷酸和小干扰RNA, 分别转染肝星状细胞株HSC-T6, 逆转录PCR技术检测细胞中RhoA和Ⅰ型胶原mRNA的表达; Western blot检测细胞中RhoA蛋白质的表达; ELISA检测培养上清中透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)及PIIIP的含量.
结果: 转染RhoA反义寡核苷酸和小干扰RNA Rat1质粒后, HSC-T6中RhoA mRNA的表达分别由0.892±0.051、0.937±0.044降为0.113±0.024、0.212±0.042; 蛋白质表达水平均明显下调; 细胞内Ⅰ型胶原mRNA的表达分别由0.709±0.067、0.695±0.087降为0.436±0.037、0.201±0.044; 细胞外基质成分如HA、LN及PIIIP的表达水平明显下降. 两者相比, 小干扰RNA具有更强的生物学效应.
结论: 靶向抑制细胞因子RhoA的表达可明显减少肝星状细胞株HSC-T6细胞外基质的合成, 且小干扰RNA的效果明显优于针对同一靶点的反义寡核苷酸, 显示RNAi技术应用于肝纤维化基因治疗的良好前景.
Keywords: RhoA; 反义寡核苷酸; 小干扰RNA; 肝纤维化; 基因治疗