基础研究
Copyright ©The Author(s) 2010. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2010-01-08; 18(1): 14-19
Published online 2010-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v18.i1.14
BrdU作为脂肪干细胞标记示踪法的可行性
顾广祥, 施晓雷, 杭化莲, 丁义涛
顾广祥, 丁义涛, 南京医科大学鼓楼临床医学院肝胆外科 江苏省南京市 210008
施晓雷, 杭化莲, 南京大学附属鼓楼医院肝胆外科 江苏省南京市 210008
顾广祥, 在读硕士, 主要从事消化系疾病的研究.
作者贡献分布: 此课题由顾广祥、施晓雷及丁义涛设计; 研究过程由顾广祥、施晓雷及杭化莲操作完成; 研究所用试剂及分析工具由丁义涛提供; 数据分析由顾广祥完成; 本论文写作由顾广祥、施晓雷及丁义涛完成.
通讯作者: 丁义涛, 主任医师, 210008, 江苏省南京市, 南京医科大学鼓楼临床医学院肝胆外科. yitaoding@hotmail.com
电话: 025-83107080
收稿日期: 2009-10-16
修回日期: 2009-11-09
接受日期: 2009-11-16
在线出版日期: 2010-01-08
Abstract

目的: 研究BrdU标记猪脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)的最佳剂量及时间, 探讨其作为干细胞标记示踪方法的可行性.

方法: 自中华实验猪背部提取脂肪组织, 采用贴壁法分离培养ADSCs, 取第3代细胞以终浓度分别为10、15、20、25及30 μmol/L BrdU进行标记; 另一孔不含BrdU作为对照组, 分别培养12、24、48、72及96 h. 免疫荧光法检测各组细胞BrdU标记率, 找出BrdU的最佳标记方法, 通过台盼蓝排斥试验、MTT及细胞凋亡检测, 观察BrdU对ADSCs生长情况的影响. 对第3代的ADSCs采用最佳标记方法后更换普通培养基继续培养, 适时传代, 连续检测第4、5、6、7、8代ADSCs的BrdU标记率.

结果: 原代培养的ADSCs的形态主要为长梭形, 第3代ADSCs经BrdU标记后胞核呈红色荧光, 随浓度的升高及时间的延长, BrdU阳性标记率逐渐升高, 以终浓度20 μmol/L BrdU标记48 h后阳性率达90%以上, 且连续传5代标记率仍达40%. MTT、台盼蓝排斥试验及细胞凋亡检测发现BrdU对ADSCs生长增殖基本无影响.

结论: BrdU标记ADSCs的最佳剂量和时间为20 μmol/L和48 h, 该方法标记率高, 对细胞影响小, 可用于动态研究ADSCs在移植体内生长、分化.

Keywords: 脂肪干细胞; 5-溴脱氧尿嘧啶核苷; 标记