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IRAK-M在内毒素诱导Kupffer细胞耐受中的表达及其意义
李旭宏, 重庆三峡中心医院肝胆外科 重庆市 404000
陈先锋, 游海波, 刘海忠, 刘作金, 龚建平, 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科 重庆市 400010
李旭宏, 2002级重庆医科大学外科学博士, 主要从事感染信号转导机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471696; No. 30500473.
作者贡献分布: 本课题由刘作金与龚建平设计; 研究过程由李旭宏, 陈先锋, 游海波, 刘海忠及刘作金操作完成; 数据分析及论文写作由李旭宏完成.
通讯作者: 龚建平, 教授, 400010, 重庆市渝中区临江路74号, 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科. gongjianping11@hotmail.com
电话: 023-63036701
收稿日期: 2008-12-09
修回日期: 2009-01-12
接受日期: 2009-01-19
在线出版日期: 2009-03-08
修回日期: 2009-01-12
接受日期: 2009-01-19
在线出版日期: 2009-03-08
Abstract
目的: 观察内毒素耐受状态下Kupffer细胞中白介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)的表达并探讨其在Kupffer细胞内毒素耐受形成中的作用.
方法: 通过脂多糖(LPS, 10 μg/L)预处理建立内毒素耐受Kupffer细胞模型, 并与对照组细胞进行比较; 在LPS(100 μg/L)刺激后不同时点, 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中TNF-α水平, 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中TNF-α和IRAK-M的mRNA表达, TransAM NF-κB Kit检测细胞中NF-κB活性, 蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中IRAK-M蛋白表达.
结果: LPS刺激在两组细胞中均引起TNF-α释放增加, TNF-α mRNA表达以及NF-κB活性增强, 但耐受组细胞的三种指标明显低于对照组(P<0.05); 对照组细胞在LPS刺激24 h后才能检测出IRAK-M mRNA的表达, 而耐受组细胞在LPS刺激前已可检测到IRAK-M的基因表达, 且该表达在LPS刺激后迅速增强, 于6 h达高峰, 24 h时仍明显高于对照组(P<0.05); 对照组细胞在LPS刺激24 h后才有微弱的IRAK-M蛋白表达, 而耐受组细胞在LPS刺激前已有IRAK-M的蛋白表达, 并随LPS刺激进一步上调, 两组有显著差异(P<0.01).
结论: 内毒素耐受状态下, Kupffer细胞中的IRAK-M表达明显增强, IRAK-M可能在Kupffer细胞内毒素耐受形成中起重要作用.
Keywords: Kupffer细胞; 内毒素耐受; 白介素-1受体相关激酶-M