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世界华人消化杂志. 2009-12-28; 17(36): 3720-3724
Published online 2009-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i36.3720
Published online 2009-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i36.3720
HBV preS2反义锁核酸在HepG22.2.15细胞内的抗病毒效果
张梁, 邓益斌, 邓巧莹, 广西右江民族医学院附属医院医学检验中心 广西壮族自治区百色市 533000
作者贡献分布: 该实验由张梁与邓益斌设计; 实验过程由张梁、邓益斌及邓巧莹共同完成; 实验研究所需试剂及分析工具由邓益斌提供; 数据分析由张梁完成; 论文写作由张梁完成, 邓益斌审校.
通讯作者: 邓益斌, 533000, 广西壮族自治区百色市右江区中山二路18号, 广西右江民族医学院附属医院医学检验中心. enbin0776@sina.com
电话: 0776-2840703
收稿日期: 2009-10-30
修回日期: 2009-12-03
接受日期: 2009-12-07
在线出版日期: 2009-12-28
修回日期: 2009-12-03
接受日期: 2009-12-07
在线出版日期: 2009-12-28
Abstract
目的: 探讨针对HBV preS2基因mRNA翻译起始区的反义锁核酸(LNA)片段在2.2.15细胞内抗HBV复制和表达的作用.
方法: 分别合成三段互补于HBV preS2基因mRNA翻译起始区同一靶位的反义锁核酸、全硫代反义寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列, 以阳离子脂质体作为载药体系, 作用于HepG22.2.15细胞, 采用时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)和荧光定量聚合酶链技术(FQ-PCR)动态检测细胞上清液中HBsAg和HBV DNA的含量, 并比较其抑制HBV DNA复制与表达的作用; 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测LNA对细胞的毒性.
结果: 加入LNA后第1天, 即出现对HBsAg表达和HBV DNA复制的抑制作用, 第7天, 未修饰反义寡核苷酸组、全硫代修饰反义寡核苷酸组、反义锁核酸组对HBsAg表达的抑制率分别达45.79%、52.92%和67.21%; 对HBV DNA复制的抑制率分别达35.15%、40.69%和52.16%. 其中LNA抑制病毒活性最强且对细胞代谢无影响. 各组与对照组比较均有显著性差异(均P<0.01), 且反义LNA组与其他ASODN组比较也有显著性差异(均P<0.05).
结论: 针对preS2基因的反义锁核酸体外能有效抑制HBV的复制与表达, 故preS2基因可作为乙型肝炎基因治疗的有效靶位.
Keywords: 乙型肝炎病毒; 锁核酸; 前S2基因; 2.2.15细胞; 基因治疗