基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-11-08; 17(31): 3210-3213
Published online 2009-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i31.3210
人FUT3基因真核表达载体的构建与表达
岳丽玲, 樊丽, 刘吉成
岳丽玲, 樊丽, 刘吉成, 齐齐哈尔医学院医药科学研究所 黑龙江省齐齐哈尔市 161006
岳丽玲, 黑龙江中医药大学 黑龙江省哈尔滨市 150040
岳丽玲, 在读博士, 副教授, 主要从事多糖抗肿瘤的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30772751; 黑龙江省青年科学资金资助项目, No. QC08C28.
作者贡献分布: 本课题由岳丽玲与樊丽设计; 研究过程由岳丽玲与樊丽操作, 刘吉成指导完成; 本论文写作由岳丽玲完成.
通讯作者: 刘吉成, 教授, 博士生导师, 161006, 黑龙江省齐齐哈尔市, 齐齐哈尔医学院医药科学研究所. qyybliu@126.com
电话: 0452-2663103
收稿日期: 2009-09-02
修回日期: 2009-11-02
接受日期: 2009-11-02
在线出版日期: 2009-11-08
Abstract

目的: 构建增强型绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-C1-FUT3真核表达载体, 分析其在细胞系MDA-MB-231中的表达.

方法: 采用RT-PCR扩增FUT3全长基因片段, 克隆至pMD18-T载体进行测序分析, 将FUT3亚克隆至pEGFP-C1表达载体并酶切鉴定. 利用脂质体将重组真核表达载体pEGFP-C1-FUT3转染入人乳腺癌细胞MDA-MB-231中, 经G418筛选获得稳定转染的细胞系, 荧光显微镜观察及RT-PCR检测FUT3的表达.

结果: 成功获得人全长FUT3基因并构建了真核表达载体pEGFP-C1-FUT3, 体外转染MDA-MB-231细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达, 半定量RT-PCR检出高水平表达的FUT3.

结论: 成功构建了增强型绿色荧光蛋白为报告基因的FUT3真核表达载体, 并在MDA-MB-231中稳定表达, 为进一步研究FUT3的生物学功能提供基础.

Keywords: α 1, 3-岩藻糖基转移酶Ⅲ; 增强型绿色荧光蛋白; 基因克隆