研究快报
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世界华人消化杂志. 2009-10-28; 17(30): 3128-3133
Published online 2009-10-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i30.3128
靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞生长的影响
王波, 张全乐, 晏维, 夏丽敏, 刘梅, 田德安
王波, 张全乐, 晏维, 夏丽敏, 刘梅, 田德安, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30800968.
作者贡献分布: 王波与张全乐对此文所作贡献均等; 此课题由张全乐、王波、刘梅及田德安设计; 研究过程由张全乐、晏维及夏丽敏完成; 数据分析由张全乐完成; 论文书写由王波与田德安完成.
通讯作者: 田德安, 主任医师, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科. tiandeanwh@medmail.com.cn
电话: 027-83663611
收稿日期: 2009-08-18
修回日期: 2009-09-23
接受日期: 2009-09-28
在线出版日期: 2009-10-28
Abstract

目的: 观察携带shRNA的重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响, 并初步探讨其分子机制.

方法: 设计3对针对Pokemon基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体, 脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞. RT-PCR及Western blot检测转染前后Pokemon mRNA及蛋白质的表达, MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖及凋亡的变化, RT-PCR检测其可能的下游因子β-catenin及H-ras的表达.

结果: 成功构建含shRNA片段的重组质粒, 依次命名为pshRNA1、2、3. 转染HepG2细胞后, Pokemon基因的mRNA及蛋白质表达水平明显下调, 以pshRNA2最强, 抑制率分别为75.2%(RNA水平)和72.61%(蛋白质水平). MTT显示pshRNA2可明显抑制细胞增殖; 流式细胞仪测定转染后细胞凋亡增加; RT-PCR显示下游因子H-ras的表达明显降低(P<0.05), 而β-catenin的表达没有变化(P>0.05).

结论: 采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon基因的表达; Pokemon基因有促进肝癌细胞株增殖及抑制其凋亡的作用, 该效应可能与下调其下游因子H-ras的表达有关.

Keywords: Pokemon; 短发夹状RNA; 细胞增殖; 细胞凋亡; H-ras