Published online 2009-09-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i26.2654
修回日期: 2009-08-24
接受日期: 2009-08-31
在线出版日期: 2009-09-18
目的: 探讨大鼠骨髓间充质细胞向肝细胞样细胞的诱导分化, 观察诱导分化细胞的形态和分子生物学特性, 及其对急性肝损伤大鼠的治疗作用.
方法: 分离、培养并纯化大鼠骨髓间充质细胞, 培养基中加入肝细胞生长因子(HGF)、纤维生长因子-4(FGF-4)及上皮细胞生长因子(EGF), 分别于7、14、21、28 d观察细胞形态变化, 采用RT-PCR方法检测细胞白蛋白(ALB)、甲种胎儿球蛋白(AFP)、细胞角蛋白-18(CK-18)的mRNA表达, 将诱导分化28 d的细胞经DAPI染料染色后, 经门静脉注入同种异体大鼠体内, 经24、48、72及168 h分批处死大鼠, 观察大鼠肝组织内荧光细胞的分布. 大鼠腹腔注射硫代乙酰胺制作急性肝衰竭模型, 将1×106及5×106个诱导分化细胞经门静脉注入大鼠体内, 经48、168 h采血查肝功, 168 h处死大鼠, 取肝组织病理学检查.
结果: 大鼠间充质细胞经上述3种细胞因子诱导后, 形态和生物学行为方面都发生向肝细胞样细胞方面的转化, 经门静脉注入大鼠体内后, 有大量该种细胞在肝组织内分布, 24 h荧光细胞最多, 随时间延长逐渐减少, 可持续7 d. 骨髓间充质细胞的诱导分化细胞经门静脉注入肝损伤模型大鼠体内后, 大鼠肝功能有所好转, 注入1×106细胞大鼠ALT由注入前238.0±113.5 U/L, 48 h后降至189±68.4 U/L, 168 h后降至149.0±54.2 U/L, TBIL由注入前2.9±1.6 µmol/L, 48 h至3.0±1.4 µmol/L, 168 h至1.3±0.3 µmol/L; 注入5×106个细胞者(ALT)由注入前238.0±113.5 U/L, 48 h后降至169.7±46.0 U/L, 168 h后降至103.7±46.0 U/L, TBIL由注入前2.9±1.6 µmol/L, 48 h至2.9±1.3 µmol/L, 168 h至0.9±0.3 µmol/L.
结论: 大鼠骨髓间充质细胞可在某些细胞因子的诱导作用下发生类肝细胞样转化, 将转化细胞经门静脉植入同种异体大鼠体内后可在肝组织内存活并对大鼠肝损伤有一定修复作用.