基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-09-08; 17(25): 2550-2554
Published online 2009-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i25.2550
体外灌注法分离大鼠肝脏Kupffer细胞及原代培养
曾仲, 黄汉飞, 宋飞, 段键
曾仲, 黄汉飞, 宋飞, 段键, 昆明医学院第一附属医院器官移植中心 云南省昆明市 650032
曾仲, 中国人民解放军第三军医大学博士, 副主任医师, 主要从事肝脏移植缺血再灌注损伤研究.
基金项目: 云南省自然科学基金资助项目, No. 2007C137M; 云南省科技厅联合基金资助项目, No. 2007C0009R.
作者贡献分布: 本文由曾仲设计; 研究过程由曾仲、黄汉飞及宋飞操作完成; 实验技术由段键指导; 本论文写作有曾仲与黄汉飞完成.
通讯作者: 曾仲, 副主任医师, 650032, 云南省昆明市西昌路295号, 昆明医学院第一附属医院器官移植中心. zzong@medmail.com.cn
电话: 0871-5359202
收稿日期: 2009-06-16
修回日期: 2009-08-22
接受日期: 2009-08-24
在线出版日期: 2009-09-08
Abstract

目的: 探讨一种简便、高效的大鼠离体肝脏分离Kupffer细胞(KCs)及原代培养的方法.

方法: 采用大鼠肝脏离体Ⅳ型胶原酶灌注, 剪碎肝脏, 37℃消化30 min, 低速离心去除肝细胞, Percoll不连续密度梯度离心和选择性贴壁的方法分离KCs. 通过墨汁吞噬实验和ED2免疫细胞化学来鉴定KCs.

结果: 分离的KCs的得率在细胞贴壁前(2.1±0.3)×106/g肝脏、贴壁后(1.5±0.1)×106/g肝脏, 用0.4%台盼蓝染色, 活率大于92%, ED2染色阳性的细胞达90%以上, 分离的细胞培养后功能完整并延伸呈不规则型.

结论: 本实验建立的大鼠肝脏KCs的分离培养方法简便、高效、稳定, 培养的细胞具有良好的生物学性状, 为进一步研究提供基础.

Keywords: Kupffer细胞; 细胞分离; 原代培养