基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-07-18; 17(20): 2021-2025
Published online 2009-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i20.2021
TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用
戴东方, 陈德玉, 邵世和
戴东方, 陈德玉, 邵世和, 江苏大学附属医院放疗科 江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室 江苏省镇江市 212001
戴东方, 在读硕士, 主要从事消化系疾病的研究.
作者贡献分布: 戴东方与陈德玉对此文所作贡献均等; 本课题由戴东方、陈德玉及邵世和设计; 陈德玉为课题总负责人; 邵世和提供技术指导; 研究过程、数据分析及论文写作由戴东方完成.
通讯作者: 陈德玉, 副教授, 212001, 江苏省镇江市, 江苏大学附属医院放疗科. ddffwlqe@163.com
电话: 0511-85037530
收稿日期: 2009-05-11
修回日期: 2009-06-16
接受日期: 2009-06-23
在线出版日期: 2009-07-18
Abstract

目的: 构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体, 抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.

方法: 构建TROP2短发夹环RNA, 产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞, 转染24 h后用G418 (浓度400 mg/L)筛选, 待细胞稳定后收集, 分别命名为W组(未处理组), HK组(随机阴性对照质粒组), KB组(空质粒组), T1组, T2组, T3组. 并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.

结果: TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中, 重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致. 与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比, 转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制. 与T1、T2组相比, T3组对TROP2 mRNA和蛋白抑制作用最明显, 差异具统计学意义(8.79±0.23 vs 9.54±0.20, 9.57±0.23; 3.66±0.11 vs 6.46±0.36, 9.31±0.11, 均P<0.05).

结论: 成功构建了针对TROP2的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达, 为进一步研究其基因功能打下了基础.

Keywords: 胃癌; RNA干扰; TROP2; BGC-823细胞系