基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-11-28; 16(33): 3729-3733
Published online 2008-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i33.3729
谷氨酰胺对体外培养肠上皮细胞屏障通透性的影响
崔巍, 闻颖, 董亚珞, 刘沛
崔巍, 闻颖, 董亚珞, 刘沛, 中国医科大学附属第一医院传染科 辽宁省沈阳市 110001
崔巍, 副教授, 主要从事肠黏膜屏障的临床和科研工作.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30670947.
作者贡献分布: 此课题由刘沛设计; 研究过程主要由崔巍操作完成; 闻颖与董亚珞对数据分析及论文写作提供帮助.
通讯作者: 刘沛, 110001, 辽宁省沈阳市和平区南京街155号, 中国医科大学附属第一医院传染科. weicuisy@tom.com
电话: 024-83282199 传真: 024-31535053
收稿日期: 2008-08-20
修回日期: 2008-10-30
接受日期: 2008-11-03
在线出版日期: 2008-11-28
Abstract

目的: 探讨谷氨酰胺保护肠黏膜屏障功能的作用机制.

方法: Caco-2细胞(20-30代)应用含有不同浓度谷氨酰胺(0、0.1、1、4 mmol/L)的DMEM培养液在Transwell上培养21 d, 检测跨上皮电阻的变化. 免疫荧光染色检测紧密连接蛋白occludin的定位、表达. 应用不同裂解液制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架, 分别进行蛋白印迹杂交检测活性和非活性occludin蛋白的相对含量.

结果: 与0 mmol/L GLN组比较, 补充GLN后, 跨上皮电阻明显升高(21.4±0.1, 124.5±0.3, 173.6±0.2 vs 11.3±0.3, 均P<0.05). 免疫荧光染色可见0 mmmol/L GLN组occludin呈团状分布于细胞胞质内, 随着GLN浓度的增加, occludin阳性荧光染色呈沿细胞膜分布的蜂巢状线性荧光. GLN缺乏不影响65 kDa occludin蛋白的表达, 但能降低85 kDa occludin蛋白的表达(1.04±0.03, 1.17±0.04, 1.29±0.03, 1.43±0.06, P<0.05).

结论: 谷氨酰胺缺乏能够减少活性紧密连接蛋白occludin的表达, 增加肠上皮细胞屏障通透性, 补充GLN能够阻断这些改变.

Keywords: 谷氨酰胺; 肠黏膜屏障; 紧密连接蛋白