基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-08-18; 16(23): 2581-2586
Published online 2008-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i23.2581
乙型肝炎病毒全S蛋白与纤维蛋白原α链的相互作用
周飞, 任建林, 卢雅丕, 陈美娅, 许鸿志, 潘金水, 蔡稼燕, 董菁
周飞, 任建林, 卢雅丕, 陈美娅, 许鸿志, 潘金水, 蔡稼燕, 董菁, 厦门大学附属中山医院消化内科; 厦门大学消化疾病研究所; 厦门市消化疾病中心, 福建省厦门市 361004
周飞, 福建医科大学硕士在读, 主要从事乙型肝炎病毒的基础研究.
基金项目: 福建省青年科技人才创新项目福建省高校新世纪人才创新资助项目; 厦门市首批重大疾病科研攻关项目, No. WKZ0501; 厦门市卫生局医学科研立项项目, No. WSK0506; 厦门大学引进人才科研启动基金, No. Z03109.
作者贡献分布: 此课题由周飞, 任建林, 卢雅丕, 陈美娅及董菁设计; 研究过程由周飞, 卢雅丕, 陈美娅, 许鸿志, 潘金水及蔡稼燕操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由任建林, 潘金水及董菁提供; 数据分析由周飞, 许鸿志, 潘金水及董菁完成; 本论文写作由周飞与董菁完成.
通讯作者: 董菁, 361004, 福建省厦门市, 厦门大学附属中山医院消化内科. dj@xmzsh.com
电话: 0592-2293171
收稿日期: 2008-05-27
修回日期: 2008-07-08
接受日期: 2008-07-14
在线出版日期: 2008-08-18
Abstract

目的: 筛选人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白相互作用蛋白的基因, 并反向验证HBV全S蛋白候选结合蛋白之间相互作用.

方法: 将全S基因定向克隆到酵母表达载体pDEST 32, 构建正向筛选的诱饵质粒并Western blot法验证其在酵母中的表达. 将诱饵质粒与人肝细胞cDNA文库质粒共同转化MaV203酵母细胞, 在人肝细胞cDNA文库筛选候选结合蛋白, 提取阳性菌落质粒测序, 并分析其生物学性质. 将筛选出的纤维蛋白原α链中下游序列及不同全S变异株基因, 分别定向克隆到pDEST32及pDEST22载体中, 利用Western blot法验证表达. 将诱饵质粒与猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞, 以反向酵母双杂交方法验证初筛结果的可靠性及正确性.

结果: 正向的酵母双杂交实验, 经初筛和再转染实验纤维蛋白原α链可与HBV全S蛋白发生相互作用. 再以纤维蛋白原α链为靶基因设计诱饵质粒, 以四种变异的HBV全S蛋白为靶基因设计猎物质粒, 反向酵母双杂交法证实维蛋白原α链中下游可与不同全S变异体(总差异率2%)发生相互作用, 纤维蛋白原α链与全S蛋白的结合域可能为病毒蛋白的前268aa.

结论: 纤维蛋白原α链中下游可与HBV全S蛋白产生特异性结合, 其结合域可能与病毒蛋白的前268aa产生相互作用.

Keywords: 乙型肝炎病毒; 全S基因; 纤维蛋白原α链; 酵母细胞双杂交技术