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世界华人消化杂志. 2008-06-18; 16(17): 1842-1848
Published online 2008-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i17.1842
Published online 2008-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i17.1842
5-氮杂胞苷抑制肝癌细胞恶性表型和逆转甲基化状态的作用及机制
董科, 俞小炯, 温尔刚, 四川省医学科学院; 四川省人民医院普外二科 四川省成都市 610072
李波, 四川大学华西医院普外二科 四川省成都市 610000
覃扬, 四川大学基础与法医学院分子生物学实验室 四川省成都市 610000
董科, 医学博士, 副主任医师, 主要从事肝胆胰疾病的基础和临床研究.
作者贡献分布: 此课题由董科设计; 李波指导; 研究过程由董科, 覃扬, 余小炯及温尔刚操作完成; 本论文写作由董科完成.
通讯作者: 温尔刚, 610072, 四川省成都市, 四川省医学科学院; 四川省人民医院普外二科. dongke1134@hotmail.com
电话: 028-89820780
收稿日期: 2007-11-04
修回日期: 2008-05-07
接受日期: 2008-05-27
在线出版日期: 2008-06-18
修回日期: 2008-05-07
接受日期: 2008-05-27
在线出版日期: 2008-06-18
Abstract
目的: 探讨DNA异常甲基化与肝细胞肝癌间的相关性及5-氮杂胞苷(5-aza-CR)抑制肝癌细胞恶性表型和逆转甲基化状态的作用及其机制.
方法: 用5-aza-CR处理肝癌细胞株HuH-7和裸鼠移植瘤模型, 然后用相差显微镜观察药物处理前后细胞形态变化, MTT法观察细胞生长速度变化, 流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率, 甲基化特异性PCR(MSP)检测p16基因5'CpG岛甲基化状态, RT-PCR法检测p16 mRNA的表达情况.
结果: 5-aza-CR对肿瘤细胞HuH-7和裸鼠移植瘤细胞均有明显的抑制作用; 实验组HuH-7细胞周期G0/G1期延长41.1%±3.2%, S期缩短39.0%±1.4%, G2期缩短2.2%±0.7%, 凋亡细胞增加30.0%±4.5%; 裸鼠移植瘤细胞周期G0/G1期延长27.4%±3.1%, S期缩短25.8%±2.1%, G2期缩短1.6%±1.8%, 凋亡细胞增加2.9%±0.6%; 对照组HuH-7与裸鼠细胞仅甲基化引物扩增出特异PCR条带, 实验组HuH-7细胞仅非甲基化引物扩增出特异PCR条带, 而实验组裸鼠细胞甲基化和非甲基化引物均扩增出特异PCR条带; 实验组肿瘤细胞HuH-7和裸鼠移植瘤细胞的p16 mRNA均有表达, 而对照组则无表达.
结论: 5-aza-CR在体外和体内均有抑制肝癌细胞生长、阻滞细胞周期G1/S和促进p16 mRNA表达的作用; 5-aza-CR可抑制肝癌细胞恶性表型和逆转p16甲基化状态.
Keywords: 5-氮杂胞苷; 肝癌; p16基因; 甲基化特异性PCR; 移植瘤