Copyright
©The Author(s) 2008. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2008-05-28; 16(15): 1607-1611
Published online 2008-05-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i15.1607
Published online 2008-05-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i15.1607
荧光原位明胶酶谱法对肝组织明胶酶活性的检测
陈倩, 沈丽, 何琦麟, 陶艳艳, 刘成海, 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所 上海市 201203
刘成海, 上海高校中医内科学E-研究院 上海市 201203
陈倩, 博士在读, 主要从事中医药抗肝纤维化的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30772869.
作者贡献分布: 此课题由刘成海设计; 研究过程由陈倩, 沈丽, 何琦麟及陶艳艳操作完成; 图片分析由陈倩和刘成海完成; 本论文写作由陈倩, 刘成海及陶艳艳完成.
通讯作者: 刘成海, 201203, 上海市浦东新区蔡伦路1200号, 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所. chenghai_liu@yahoo.com.cn
电话: 021-51328888-8111传真: 021-51328500
收稿日期: 2007-12-04
修回日期: 2008-04-07
接受日期: 2008-05-20
在线出版日期: 2008-05-28
修回日期: 2008-04-07
接受日期: 2008-05-20
在线出版日期: 2008-05-28
Abstract
目的: 建立荧光原位明胶酶谱法, 观察纤维化和急性损伤肝组织明胶酶活性表达特点.
方法: 复制二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型与N-乙酰半乳糖胺/脂多糖急性肝损伤模型, 取其肝组织冰冻切片, 将绿色荧光明胶底物附着于肝组织冰冻切片上, 置于酶反应缓冲液中避光孵育8-24 h; 再以Hoechst液复染细胞核, 在荧光显微镜下分别以蓝光激发拍摄明胶酶绿色荧光和紫光激发拍摄细胞核蓝色荧光, 并将图像重叠.
结果: 成功建立荧光原位明胶酶谱法. 正常大鼠肝组织仅在肝窦周围少量明胶酶表达, 纤维化及急性肝损伤肝组织肝窦处明胶酶活性增强, 纤维化肝组织纤维间隔处明胶酶活性也较强.
结论: 荧光原位明胶酶谱法具有灵敏, 直观, 简便的优点, 可较好分析肝组织明胶酶活性水平与表达位置, 对研究肝脏病理与药理具有重要意义.
Keywords: 明胶酶活性; 荧光原位明胶酶谱法; 肝脏