基础研究
Copyright ©The Author(s) 2012. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2008-05-08; 16(13): 1373-1377
Published online 2008-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i13.1373
shRNA干扰SMYD3对肝癌细胞c-Myc表达及凋亡的影响
刘鑫, 陈立波, 叶进, 江军, 何军, 徐鋆耀, 钱伟
刘鑫, 叶进, 江军, 钱伟, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科 湖北省武汉市 430022
陈立波, 何军, 华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科 湖北省武汉市 430022
徐鋆耀, 中山大学附属第二医院肝胆外科 广东省广州市 510120
刘鑫, 华中科技大学同济医学院在读硕士, 主要从事肝病(肝癌)研究.
作者贡献分布: 刘鑫和叶进对此文所作贡献均等; 此课题由刘鑫、陈立波、叶进、江军及何军设计; 研究过程由刘鑫、江军、何军及钱伟操作; 所用新试剂及分析工具由徐鋆耀和钱伟完成; 数据分析由刘鑫、江军和何军完成; 本论文写作由刘鑫、陈立波及叶进完成.
通讯作者: 叶进, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科. yejin8688@sina.com
收稿日期: 2007-11-19
修回日期: 2008-03-01
接受日期: 2008-05-02
在线出版日期: 2008-05-08
Abstract

目的: 观察SMYD3(SET and MYND-domain containing 3)基因沉默后c-Myc的表达及对HepG2细胞凋亡的影响.

方法: 构建针对SMYD3的shRNA干扰质粒Pgenesil-1-s1、Pgenesil-1-s2和阴性对照质粒Pgenesil-1-hk, 同时设空白对照组, 采用Lipofectamine2000脂质体介导转染法转染质粒. 转染后24、48、72 h, RT-PCR检测HepG2细胞SMYD3和c-Myc的表达情况. 流式细胞术法检测各组细胞的凋亡.

结果: SMYD3、c-Myc基因在HepG2细胞中强表达. RT-PCR显示Pgenesil-1-s1、Pgenesil-1-s2转染组与阴性对照质粒转染组Pgenesil-1-hk转染24、48、72 h后相比, SMYD3基因表达均明显受到抑制(F = 67.46, P<0.01; F = 176.79, P<0.01; F = 175.28, P<0.01), 同时c-Myc表达下调(三组之间: F = 11.58, P = 0.009; F = 126.41, P<0.01; F = 261.25, P<0.01). Pgenesil-1-s1、Pgenesil-1-s2转染组细胞早期凋亡率与Pgenesil-1-hk转染组(LSD-t = -13.58, -12.62, 均P<0.01)、空白组(LSD-t = -18.62, -17.67, 均P<0.01)相比有显著性差异.

结论: RNA干扰技术特异性沉默HepG2细胞SMYD3基因后, 抑制了c-Myc的表达, 促进了HepG2细胞的凋亡.

Keywords: SMYD3基因; c-Myc; 短发夹RNA; 凋亡; 肝癌