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L02细胞在倒千里光碱处理大鼠肝中的增殖
林沪, 毛青, 王宇明, 蒋业贵, 蒋黎, 中国人民解放军第三军医大学西南医院感染病研究所 重庆市 400038
林沪, 硕士, 主治医师, 主要从事肝炎发病机制和病毒性肝炎动物模型的研究.
基金项目: 国家自然科基金资助项目, No. 30271173.
通讯作者: 毛青, 400038, 重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号, 中国人民解放军第三军医大学西南医院感染病研究所. qingmao@yahoo.com
电话: 023-65399064传真: 023-68754475
收稿日期: 2006-11-20
修回日期: 2006-12-01
接受日期: 2006-12-08
在线出版日期: 2007-02-08
修回日期: 2006-12-01
接受日期: 2006-12-08
在线出版日期: 2007-02-08
Abstract
目的: 应用倒千里光碱(retrorsine, Rts), 研究正常人L02肝细胞移植到具有正常免疫活性的大鼠肝内的存活与增殖情况.
方法: SD大鼠出生前宫内ip人L02肝细胞, 诱导胎鼠对人L02肝细胞产生免疫耐受, 出生3 wk后分别ip Rts或生理盐水, 再经脾移植DiI (1, 1'-dioctadecyl-3, 3, 3', 3'-tetramethylindo-carbocyanine perchlorate)染色后的人L02肝细胞, 建立人鼠嵌合肝动物模型. 采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)、免疫组化、DiI荧光示踪等方法, 在不同时相分别检测人白蛋白、人白蛋白mRNA、特异性人增殖细胞核抗原(PCNA)以及在荧光显微镜下观察人L02肝细胞在鼠肝内的分布, 并采用计算机图像分析系统分析不同时相PCNA阳性细胞的数密度和面积密度.
结果: 实验组于移植后1 wk-6 mo, 在荧光显微镜下观察到人L02肝细胞在鼠肝内的动态分布, 而对照组为移植后1-10 wk; 实验组移植后2 wk-6 mo, 大鼠检测出人白蛋白、人白蛋白mRNA及特异性人增殖细胞核抗原PCNA, 而对照组分别于移植后2-8 wk检测出白蛋白及人白蛋白mRNA, 移植后2 wk-6 mo检测出特异性人PCNA. 以上各组阳性细胞的出现均以移植4 wk最多. PCNA阳性细胞的数密度和面积密度均显示, 特异性人PCNA组与其对照组比较有统计学差异(P<0.05).
结论: Rts对移植L02细胞有明显的增殖作用, L02细胞在人鼠嵌合肝动物模型中存活并增殖6 mo以上.
Keywords: 肝细胞; 嵌合肝; 移植; 大鼠; 增殖; 倒千里光碱