基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-10-18; 15(29): 3079-3084
Published online 2007-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i29.3079
DMSO促进HepG2细胞感染乙型肝炎病毒后核心蛋白入核
潘孝本, 韩进超, 魏来, 高燕, 丛旭
潘孝本, 韩进超, 魏来, 高燕, 丛旭, 北京大学肝病研究所 北京大学人民医院 北京市100044
潘孝本, 主要从事乙型肝炎病毒分子生物学研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30700697; 国家"973"计划资助项目, No. 2005CB522902.
通讯作者: 魏来, 100044, 北京市西城区西直门南大街11号, 北京大学人民医院, 北京大学肝病研究所. weelai@163.com
电话: 010-88325566 传真: 010-68318386
收稿日期: 2007-08-06
修回日期: 2007-09-25
接受日期: 2007-09-28
在线出版日期: 2007-10-18
Abstract

目的: 探讨DMSO诱导处理的HepG2细胞被HBV感染的作用机制.

方法: 将HepG2分为DMSO处理组和对照组，分别用添加或不添加2% DMSO的DMEM培养基培养4 d. 将HBV病毒颗粒(1000拷贝/细胞)加入培养基中于37℃感染12 h. 以蛋白免疫印迹, 免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察HBcAg在细胞内的定位. 选择性PCR检测HBV cccDNA, 流式细胞分析仪检测细胞周期.

结果: 对照组HepG2细胞在感染HBV阳性血清后, HBcAg在细胞质内分布, 核内呈阴性, 至感染后2 d细胞内核心蛋白消失, 未检出明显的cccDNA信号. 2% DMSO处理后的HepG2细胞感染后12 h细胞质内HBcAg水平明显高于对照组, 感染后24 h HBcAg在核周浓集. 在感染后24 h和48 h核内HBcAg明显增高, 且cccDNA结果阳性. 流式分析结果显示DMSO处理后处于G1/G0和G2/M期的HepG2比例升高, 处于有丝分裂期的HepG2细胞内HBcAg弥散分布于全细胞.

结论: HepG2细胞感染HBV后核心颗粒不能穿过核孔携带HBV DNA进入细胞核可能是其抵制HBV感染的重要原因. DMSO可促进HBV核心颗粒进入细胞核而有助于感染.

Keywords: HepG2; 乙型肝炎病毒; 感染; DMSO; 蛋白免疫印迹; 流式细胞分析