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世界华人消化杂志. 2007-08-28; 15(24): 2607-2612
Published online 2007-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i24.2607
Published online 2007-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i24.2607
树突状细胞转染绿色荧光蛋白基因后生长特性和表型的变化
张倩倩, 李春伶, 王运平, 李锦毅, 中国人民武装警察部队总医院中心实验室 北京市 100039
张倩倩, 辽宁医学院2005级研究生, 消化内科专业, 主要从事消化道肿瘤的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No.30672771.
通讯作者: 李锦毅, 100039, 北京市海淀区永定路69号, 中国人民武装警察部队总医院中心实验室. lijinyi.li@vip.sina.com
电话: 010-88276846
收稿日期: 2007-06-08
修回日期: 2007-08-19
接受日期: 2007-08-28
在线出版日期: 2007-08-28
修回日期: 2007-08-19
接受日期: 2007-08-28
在线出版日期: 2007-08-28
Abstract
目的: 绿色荧光蛋白(EGFP-N1)标记树突状细胞, 示踪树突状细胞的生长并研究EGFP-N1对其表型表达的影响.
方法: 将EGFP-N1质粒转化入感受态菌DH5α中扩增, 经BamHⅠ酶切鉴定后大量扩增, 再提取并纯化质粒将其转染入树突状细胞, 通过荧光显微镜和示踪转染前后树突状细胞的生长及表型表达的变化.
结果: 采用该方法可以获得纯度高的绿色荧光蛋白质粒, 经过培养得到了形态典型的树突状细胞. 质粒绿色荧光蛋白能够在人树突状细胞中长期稳定表达, 转染后细胞表面标志CD80(81.90±2.44 vs 74.52±1.40), CD86(81.49±3.24 vs 78.61±1.64), CD1a(37.42±3.25 vs 18.56±2.36)的表达量明显高于未转染细胞(均P<0.05). 但是转染后细胞活性低于未转染细胞活性(67.41±3.17 vs 95.10±2.20, P<0.05).
结论: 绿色荧光蛋白能够示踪树突状细胞的生长及变化过程, 为进一步研究肿瘤复发转移及治疗提供了一种简便的新方法.
Keywords: 树突状细胞; 绿色荧光蛋白; 免疫治疗; 转染; 流式细胞仪