研究快报
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世界华人消化杂志. 2007-08-18; 15(23): 2530-2533
Published online 2007-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i23.2530
SMART技术构建人肝癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库
丁世华, 杨冬华, 汤绍辉, 叶刚
丁世华, 杨冬华, 汤绍辉, 叶刚, 暨南大学附属第一医院消化科 广东省广州市 510630
基金项目: 广东省科技攻关项目, No. 2006B19901014; 广东省名医工程研究项目, No. 2004-199.
通讯作者: 杨冬华, 510630, 广东省广州市暨南大学附属第一医院消化科. thdyang@163.com
收稿日期: 2007-04-04
修回日期: 2007-08-08
接受日期: 2007-08-28
在线出版日期: 2007-08-18
Abstract

目的: 构建肝癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库.

方法: 从肝癌细胞提取总RNA, 纯化mRNA, 用逆转录酶链式反应(RT-PCR)反转录合成cDNA第1链, LD-PCR合成cDNA第2链, 除去<500 bp小片段, 与λTripLEx2噬菌体载体连接并体外包装, 转化大肠感菌E.coli XL1-blue, 测定文库的库容和重组率, PCR鉴定插入cDNA片段大小.

结果: 构建的肝癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库, 原始库容为3.4×106 pfu/mL, 重组率为98.2%; 文库扩增后库容为9.6×108 pfu/mL, 重组率为97.2%. 重组子插入cDNA片段大小0.6-2(平均1.4) kb.

结论: 成功构建高质量的肝癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库, 为肝癌特异性抗原的筛选和鉴定奠定了基础.

Keywords: 肝细胞癌; 噬菌体; 抗原基因; cDNA文库