临床经验
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世界华人消化杂志. 2007-08-08; 15(22): 2465-2467
Published online 2007-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i22.2465
人源M2二联体靶抗原BO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定
周晔, 姚定康, 陈燕, 蒋天舒, 陈波, 仲人前, 邓安梅
周晔, 姚定康, 陈燕, 蒋天舒, 陈波, 仲人前, 邓安梅, 上海长征医院实验诊断科 上海市 200003
基金项目: 国家自然科学基金项目, No. 30471616.
通讯作者: 邓安梅, 200003, 上海市凤阳路415号, 长征医院检验科. amdeng@yahoo.com
电话: 021-63583108
收稿日期: 2007-03-01
修回日期: 2007-07-22
接受日期: 2007-07-28
在线出版日期: 2007-08-08
Abstract

目的: 表达二联体BO-E2重组融合蛋白, 以用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断.

方法: 通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增得到抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链: 二氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)相应的基因片段, 经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+), 构建重组表达载体pET28a(+)-BCOADC-E2, pET28a(+)-OGDC-E2, pET28a(+)-BO-E2, 转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质. 表达蛋白经SDS-PAGE、Western blot等鉴定.

结果: 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明, 成功地构建了3种重组质粒. 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后, 获得3种融合蛋白. 经免疫学鉴定, 重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.

结论: 重组表达的BO-E2融合蛋白将有利于PBC的实验室诊断.

Keywords: 原发性胆汁性肝硬化; 二氧酸脱氢酶复合体E2; 2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2; BO-E2融合蛋白; 蛋白印迹