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世界华人消化杂志. 2007-07-18; 15(20): 2220-2224
Published online 2007-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i20.2220
Published online 2007-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i20.2220
人类SUZ12基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
陈凤花, 胡丽华, 王琳, 李一荣, 周志明, 华中科技大学附属协和医院检验科 湖北省武汉市 430022
陈凤花, 2006年华中科技大学同济医学院博士毕业, 主治医师, 主要从事肿瘤的实验诊断研究.
基金项目: 湖北省科技攻关项目, No. 2005AA304B08.
通讯作者: 陈凤花, 430022, 湖北省武汉市, 武汉协和医院检验科. chfh100@126.com
电话: 027-85726367
收稿日期: 2006-11-01
修回日期: 2007-01-01
接受日期: 2007-01-01
在线出版日期: 2007-07-18
修回日期: 2007-01-01
接受日期: 2007-01-01
在线出版日期: 2007-07-18
Abstract
目的: 建立SYBR Green I实时荧光PCR定量检测人类SUZ12基因的方法.
方法: 将SUZ12 RT-PCR扩增片段克隆入载体pGEM-T后, 经测序鉴定正确后, 进行纯化和定量及系列稀释, 应用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测SUZ12, 建立标准曲线, 熔解曲线分析产物的特异性.
结果: 该法检测的最低拷贝数为14.2, 线性范围为1.42×101-1.42×108拷贝, 相关系数r为-1.00, 1.42×107拷贝/L标本的批内变异系数(CV)和日间CV分别为1.8%和2.8%. 熔解曲线分析显示单一的峰, 熔解温度(melting temperature, Tm)为(81.37±0.16)℃.
结论: 实时荧光定量PCR方法检测SUZ12基因, 快速有效、灵敏度高、特异性好.
Keywords: SUZ12; SYBR Green I; 实时荧光定量PCR