基础研究
Copyright ©The Author(s) 2007. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2007-01-18; 15(2): 108-113
Published online 2007-01-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i2.108
EB病毒潜伏期膜蛋白LMP2A对胃癌细胞增殖的影响
高玉, 纪静, 朱伟, 王云, 罗兵
高玉, 纪静, 王云, 罗兵, 青岛大学医学院微生物教研室 山东省青岛市 266021
朱伟, 济宁医学院微生物教研室 山东省日照市 276826
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471623.
通讯作者: 罗兵, 266021, 青岛市登州路38号, 青岛大学医学院微生物教研室. qdluobing@yahoo.com
电话: 0532-83812423 传真: 0532-83812423
收稿日期: 2006-09-28
修回日期: 2006-11-01
接受日期: 2006-11-08
在线出版日期: 2007-01-18
Abstract

目的: 构建EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的腺病毒表达载体, 探讨LMP2A表达对胃癌细胞的作用.

方法:  RT-PCR扩增获取目的基因LMP2A, 采用AdEasy系统构建携带目的基因的重组腺病毒载体pAd-2A, 脂质体法将重组质粒pAd-2A转染HEK293细胞包装重组腺病毒. 用重组腺病毒感染靶细胞SGC(胃癌细胞), 通过MTT实验、流式细胞分析、激光共聚焦检测目的基因LMP2A表达对靶细胞增殖的影响. 

结果: 限制性酶切、PCR及测序鉴定证实, 目的基因LMP2A正确插入重组质粒, HEK293细胞成功包装出具有稳定感染性的重组腺病毒, 命名为vAd-2A, 经测定病毒滴度为3.16×1012 pfu/L. MTT实验、流式细胞分析以及激光共聚焦检测结果显示, 感染腺病毒vAd-2A的SGC细胞增殖旺盛(感染vAd-2A细胞vs感染vAd细胞和未感染病毒细胞, P<0.01), S期细胞比例升高(24 h: 35.2%±5.1% vs 14.0%±3.4%, 13.2%±4.6%, P<0.01; 48 h: 25.6%±4.1% vs 12.9%±2.6%, 12.5%±3.2%, P<0.01), LMP2A可诱导细胞周期调节蛋白cyclinE的表达.

结论:  成功构建了EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的重组腺病毒表达载体, 并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒, 同时证实LMP2A可通过诱导cyclinE的表达促进SGC细胞增殖.

Keywords: EB病毒; 重组腺病毒; LMP2A; 胃癌细胞