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世界华人消化杂志. 2007-06-28; 15(18): 1995-1999
Published online 2007-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i18.1995
Published online 2007-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i18.1995
乙型肝炎病毒L蛋白颗粒的真核表达与纯化
曾建平, 中国人民解放军总医院肝胆外科 北京市 100853
易继林, 杨志芳, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科 湖北省武汉市 430030
通讯作者: 曾建平, 100853, 北京市, 中国人民解放军总医院肝胆外科. zjpdoc@163.com
电话: 010-66937781
收稿日期: 2006-12-10
修回日期: 2007-01-01
接受日期: 2007-01-10
在线出版日期: 2007-06-28
修回日期: 2007-01-01
接受日期: 2007-01-10
在线出版日期: 2007-06-28
Abstract
目的: 真核细胞中表达和纯化乙肝病毒L蛋白颗粒, 并初步分析其物理特性与抗原性.
方法: 真核表达质粒pSVsigLM-S-瞬时转染COS-7细胞, 收集48 h后的培养上清采用CsCl等密度平衡离心、蔗糖密度梯度超速离心和酶联免疫吸附试验(ELISA)3者结合的方法纯化L蛋白, 获得的纯化产物行Western blotting鉴定和透射电镜(TEM)观察.
结果: 采用超速离心结合ELISA法可以纯化L蛋白，CsCl等密度平衡离心显示在密度约1.21 g/cm3处富含S抗原性. SDS-PAGE证实产物主要由一种42 kDa的蛋白分子组成, Western blotting证实这种蛋白为同时具有S与PreS1抗原性的L蛋白. 透射电镜显示分泌的L蛋白自行组装成约23 nm的球形颗粒.
结论: 融合外源性信号肽能有效的引导L蛋白的组装和分泌. CsCl和蔗糖超速离心能高效纯化L颗粒并保持其完整的抗原性及颗粒形态.
Keywords: 乙型肝炎病毒; COS-7细胞系; 重组质粒; 超速离心; 酶联免疫吸附试验; L蛋白; 免疫印迹; 透射电镜