研究快报
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世界华人消化杂志. 2007-04-28; 15(12): 1429-1432
Published online 2007-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i12.1429
抗幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定
龙敏, 李妍, 罗军, 李明
龙敏, 罗军, 南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物系 广东省广州市 5105155
李妍, 李明, 南方医科大学生物技术学院 广东省广州市 510515
基金项目: 广东省自然科学基金资助项目, No. 5004750.
通讯作者: 李明, 510515, 广东省广州市, 南方医科大学生物技术学院. limin@fimmu.com
电话: 020-61648550
收稿日期: 2007-01-22
修回日期: 2007-02-10
接受日期: 2007-03-06
在线出版日期: 2007-04-28
Abstract

目的: 从抗幽门螺杆菌(H. pylori)全菌蛋白的单克隆抗体(mAb)中, 应用重组中性粒细胞激活蛋白(NAP), 筛选出抗NAP单抗并进行鉴定.

方法: 临床分离H. pylori DY01, DY04株. 免疫BALB/c小鼠后, 应用杂交瘤技术制备mAb. 再用ELISA方法以重组表达的NAP蛋白筛选相应的单抗, 对NAP单抗进行亚类鉴定和效价检测, 并用Western blot和免疫组化方法鉴定其特异性.

结果: 获得3株针对H. pylori-NAP蛋白的特异性mAb, 抗体亚类为IgG1, 轻链为k型. 单抗细胞培养液的抗体效价为1/16-1/32, 腹水的抗体效价是1/32000-1/64000. Western blot鉴定表明, 抗NAPmAb针对NAP蛋白产生特异性条带, 具有高度的特异性; 免疫组化分析显示: 3株NAP mAb能与H. pylori临床菌株发生特异性结合反应, 菌体染成深棕色.

结论: 获得抗H. pylori-NAP蛋白的特异性mAb,为幽门螺杆菌感染的诊断、预后判断及表位疫苗的研究提供基础.

Keywords: 幽门螺杆菌; 中性粒细胞激活蛋白; 单克隆抗体; Western blot; 免疫组化