研究快报
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世界华人消化杂志. 2007-04-28; 15(12): 1417-1420
Published online 2007-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i12.1417
表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备
徐世平, 吴本俨, 王孟薇, 高利利, 伍银桥, 蒋立新, 王卫华, 尤纬缔
徐世平, 吴本俨, 王孟薇, 高利利, 伍银桥, 王卫华, 尤纬缔, 解放军总医院南楼消化科 北京市 100853
蒋立新, 北京本元正阳基因技术有限公司 北京市 100176
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30370635.
通讯作者: 吴本俨, 100853, 北京市复兴路28号, 解放军总医院南楼消化科. benyanwu@vip.sina.com
电话: 010-66939443
收稿日期: 2007-03-06
修回日期: 2007-03-14
接受日期: 2007-03-19
在线出版日期: 2007-04-28
Abstract

目的: 构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体, 制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.

方法: 将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG213特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用BamHⅠ+BglⅡ双酶切, 回收410 bp左右目的片段, 将pSNAV2.0质粒用BamHⅠ单酶切后同目的片段连接, 经酶切和测序鉴定后, 用新建质粒脂质体转染BHK-21细胞, G418筛选后大规模培养, 再用辅助病毒HSVl-rc/ΔUL2感染, 获取病毒.

结果: 成功构建包含U6启动子和胃癌相关基因GCRG213特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体, 并制备出滴度为5×1012 vector genome/L高滴度腺相关病毒.

结论: 载体的构建为进一步研究GCRG213的体内功能打下了基础, 也将为更多的基因干预和基因的功能研究提供有效的工具.

Keywords: 胃癌; GCRG213基因; 腺相关病毒; siRNA; 基因转染