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幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性
毛小琴, 杨致邦, 张绍兰, 田一玲, 黄进, 重庆医科大学基础医学院微生物学教研室 重庆市 400016
毛小琴, 2002年重庆医科大学硕士. 主要从事幽门螺旋杆菌感染的研究.
通讯作者: 杨致邦, 400016, 重庆市, 重庆医科大学基础医学院微生物学教研室. dryangfm365@sina.com
电话: 023-68485090 传真: 023-68486859
收稿日期: 2006-01-07
修回日期: 2006-01-15
接受日期: 2006-01-26
在线出版日期: 2006-03-18
修回日期: 2006-01-15
接受日期: 2006-01-26
在线出版日期: 2006-03-18
Abstract
目的: 制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY), 了解其理化特性和生物学活性, 评价其抗H. pylori感染的作用.
方法: 以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡, 水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY), 硫酸铵沉淀法纯化IgY. 将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间, 评价其耐热性; 在不同pH的Tris-HCl中孵育一定时间, 评价其耐酸性; 加入胃蛋白酶并作用一定时间后, 评价其对酶消化的耐受作用. 以上评价均采用ELISA法测定抗体效价变化. 采用Hela细胞体外培养MTT法分析VacA-IgY对H. pylori细胞毒活性的中和作用.
结果: 本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴15min后活性保持约50%; 在pH≥5时, 抗体活性几乎无改变, pH<5时, 抗体活性下降较快, pH2.0左右, 抗体活性几乎丧失; pH4.0时, 60 kU/L胃蛋白酶作用1 h, 抗体活性几乎无变化, 2 h后活性仍保持50%以上. VacA-IgY能浓度依赖性地中和H. pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性. 20 mg/L超声提取物即可降低1/2的Hela细胞增殖能力, 80-320 mg/L的VacA-IgY能完全中和H. pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0.01).
结论: 成功制备了重组VacA的IgY, 且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H. pylori细胞毒活性的作用.
Keywords: 幽门螺杆菌; 细胞空泡毒素; 重组蛋白; 蛋黄抗体; 活性; 细胞毒性