研究快报
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世界华人消化杂志. 2006-03-08; 14(7): 714-717
Published online 2006-03-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i7.714
ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtA181V变异
闫杰, 谢雯, 王磊, 王晶波, 冯鑫, 宋淑静, 刘顺爱, 魏红山
闫杰, 谢雯, 冯鑫, 宋淑静, 刘顺爱, 魏红山, 北京地坛医院 北京市 100011
王磊, 王晶波, 山东大学医学院济南市传染病医院 山东省济南市 250021
基金项目: 首都医学发展科研基金, No. 2002-3046.
通讯作者: 闫杰, 100011, 北京市安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院. jieyan@bbn.cn
电话: 010-64211031-2330 传真: 010-64281540
收稿日期: 2006-02-06
修回日期: 2006-02-10
接受日期: 2006-02-16
在线出版日期: 2006-03-08
Abstract

目的: 建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtA181V变异的快速检测方法.

方法: 根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物, 使野生株(rt181 A)PCR产物中含有BlpⅠ酶切位点(5,GCTNAGC3), 而变异株(rt181V)无此限制性酶切位点. 选取4份应用ADV治疗1 a以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清，经PCR扩增、BlpⅠ酶切、30 g/L琼脂糖凝胶电泳, 进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析. 并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各一例进行HBV RT区基因序列分析及对照质粒的构建.

结果: 自4份血清标本中检测到2例rtA181V变异. 所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高, 可以检测到103 copies/L的HBV DNA; 特异性强, 其RFLP分析结果与DNA测序结果一致.

结论: 应用ntPCR-RFLP方法检测rtA181V变异具有灵敏、特异、简便的优点, 适用于ADV耐药变异的临床监测工作.

Keywords: 阿德福韦; 肝炎病毒; 乙型; 变异