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世界华人消化杂志. 2006-12-28; 14(36): 3509-3512
Published online 2006-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i36.3509
Published online 2006-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i36.3509
噬菌体表面展示技术筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白
陈京龙, 魏红山, 张黎颖, 北京地坛医院 北京市 100011
刘霞, 山东大学2004级硕士研究生 山东省济南市 250013
通讯作者: 魏红山, 100011, 北京市东城区安定门外大街地坛公园13号, 北京地坛医院病毒研究室. drliver@163.com
电话: 010-64211031-2358
收稿日期: 2006-08-27
修回日期: 2006-09-10
接受日期: 2006-09-25
在线出版日期: 2006-12-28
修回日期: 2006-09-10
接受日期: 2006-09-25
在线出版日期: 2006-12-28
Abstract
目的: 通过筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白, 为隐源性肝炎的发病机制研究探索新途径.
方法: 应用噬菌体表面展示技术, 将隐源性肝炎患者血清作为固相筛选蛋白, 用噬菌体正常人肝细胞T7 cDNA文库进行5轮生物筛选, 经噬斑PCR, 对筛选克隆进行DNA序列分析, 将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索, 自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列, 然后再探讨该蛋白在隐源性肝炎发病机制中的作用.
结果: 噬菌体经过5轮生物富集后, 从随机筛选的60个克隆中得到24个阳性克隆, 经序列测定后进行同源搜索, 初步确定人类HCV NS5A转化调节蛋白13(NS5ATP13)为人体肝脏中固有的与隐源性肝炎血清蛋白结合的蛋白.
结论: 应用T7 cDNA噬菌体表面展示技术, 我们发现隐源性肝炎血清蛋白与人类肝细胞HCV NS5A转化调节蛋白13相互作用, 在隐源性肝炎发生及抗病毒治疗有重要意义.
Keywords: 隐源性肝炎; 血清蛋白; 结合蛋白; 丙型肝炎病毒; 噬菌体表面展示技术