基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-07-28; 14(21): 2082-2086
Published online 2006-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i21.2082
人大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株的建立及P-gp测定
布立民, 孙淑红, 华建平, 韩英, 赖靖, 鲍文漪
布立民, 华建平, 鲍文漪, 天津市第一中心医院消化科 天津市 300000
孙淑红, 承德医学院外科教研室 河北省承德市 063700
韩英, 北京军区总医院消化科 北京市 100700
赖靖, 解放军464医院内二科 天津市 300810
布立民, 2003年军医进修学院硕士生, 主治医师, 主要从事胃肠道肿瘤的诊治研究.
通讯作者: 韩英, 100700, 北京市东城区南门仓5号, 北京军区总医院消化内科.
电话: 010-66721009
收稿日期: 2006-05-16
修回日期: 2006-05-22
接受日期: 2006-06-05
在线出版日期: 2006-07-28
Abstract

目的: 建立人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/5-FU及并对其耐药机制进行探讨.

方法: 先采用较大剂量间歇诱导法进行筛选, 再采用浓度梯度递增法作用, 历时7 mo, 至HCT8细胞可长期在5-FU浓度为2.0 mg/L的细胞培养液中稳定生长. 电镜、HE染色观察2种细胞形态结构差异. 体外细胞毒性实验观察他对5-FU, ADM, DDP的耐药性. 绘制亲本细胞和耐药细胞的体外生长曲线. 罗丹明染色法检测其两种细胞P-gp功能表达.

结果: HCT-8细胞株经7 mo诱导, 可在5-FU 2.0 g/L的培养液中稳定增殖, 具有多药耐药性, 命名为HCT-8/5-FU, 该细胞株对5-FU的耐药指数为16.6, 并对ADM, DDP有交叉耐药性. 该细胞株体外群体倍增时间与亲本细胞差别不显著. HE染色观察耐药细胞胞体较亲本细胞大, 细胞核不规则, 可见双核、多形核, 细胞形态不规则, 呈多角形、细长形改变, 可见巨核细胞. 透射电镜下耐药细胞胞质内线粒体、内质网、溶酶体增多. 流式细胞仪罗丹明染色法观察荧光强度曲线左移, 提示耐药细胞有过度P-gp表达.

结论: 成功建立HCT-8/5-FU多药耐药细胞株. 先采用较大剂量间歇诱导进行筛选, 再采用浓度梯度递增法作用是诱导大肠癌耐药细胞株的较好方式. HCT-8/5-FU细胞株的耐药机制与P-糖蛋白表达有关.

Keywords: 肿瘤细胞; 细胞培养; 大肠癌; 耐药细胞株; 多药耐药; P-糖蛋白