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世界华人消化杂志. 2006-04-28; 14(12): 1172-1177
Published online 2006-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i12.1172
Published online 2006-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i12.1172
RNA干扰抑制HepG2-N10细胞系中HBV基因表达及复制
潘金水, 任建林, 董菁, 施华秀, 厦门大学附属中山医院消化内科 福建省厦门市 361004
程通, 福建省分子医学病毒研究中心, 厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 福建省厦门市 361004
黄松洁, 厦门大学附属中山医院厦门市临床检验中心 福建省厦门市 361004
潘金水, 在读硕士研究生, 厦门大学附属中山医院消化内科主治医师, 主要从事消化道肿瘤分子生物学研究.
通讯作者: 任建林, 361004, 福建省厦门市, 厦门大学附属中山医院消化内科. jianlinr@msn.com
电话: 0592-2292017 传真:0592-2292017
收稿日期: 2006-02-22
修回日期: 2006-03-01
接受日期: 2006-03-15
在线出版日期: 2006-04-28
修回日期: 2006-03-01
接受日期: 2006-03-15
在线出版日期: 2006-04-28
Abstract
目的: 评估以U6启动子作为启动序列(pSilencer2.0-U6)载体介导的小RNA干扰片段在培养细胞株中抑制HBV复制的效应.
方法: 将针对HBV基因组不同区域(S, X及C区)的核苷酸序列插入至pSilencer载体中, 并将重组后的pSilencer质粒(分别为pS, pX及pC)载体转染入HepG2-N10细胞株(可稳定表达HBsAg、HBeAg及adw2亚型Dane颗粒)中. 以ELISA法检测病毒抗原, 以逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测病毒mRNA, 并以荧光定量PCR法检测分泌入培养基的共价闭合环状DNA(covalent closed circular DNA, cccDNA).
结果: 质粒载体介导的RNA干扰能明显抑制培养基中HBsAg及HBeAg的表达. 并且RT-PCR法检测显示病毒mRNA也被降解了, 从而减少了蛋白表达及病毒逆转录复制的模板. 荧光定量PCR法检测显示分泌入培养基的cccDNAs明显下降(HBV DNA log10: pS: 4.00±0.13; pC: 4.08±0.10; pX: 4.28±0.06; pN: 5.05±0.07; HepG2-N10: 4.74±0.06; HepG2: <2.70).
结论: RNA干扰能抑制HBV基因表达及病毒复制, 并且RNA干扰可能为HBV的治疗带来巨大的变化.
Keywords: 乙肝病毒; RNA干扰; 病毒复制