基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-04-15; 13(8): 958-962
Published online 2005-04-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i8.958
TatPTD介导HBV靶向核糖核酸酶进入肝细胞的研究
丁劲, 刘军, 薛采芳, 李英辉, 赵亚, 陈俊, 黄豫晓, 刘忠湘
丁劲, 刘军, 薛采芳, 李英辉, 赵亚, 陈俊, 黄豫晓, 刘忠湘, 中国人民解放军第四军医大学病原生物学教研室 陕西省西安市 710032
丁劲, 男, 1976-11-3生, 内蒙古呼和浩特人, 汉族, 博士生, 主要从事乙型肝炎的治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 30100157; 全军医药卫生科研基金资助课题, No. 01MA184; 第四军医大学创新工程资助课题, No. CX99005.
通讯作者: 刘军, 710032, 陕西省西安市长乐西路169号, 中国人民解放军第四军医大学病原生物学教研室. etiology@fmmu.edu.cn
电话: 029-83374536 传真: 029-83374594
收稿日期: 2004-09-22
修回日期: 2004-10-11
接受日期: 2004-10-20
在线出版日期: 2005-04-15
Abstract

目的: 利用HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain, PTD)高效的跨膜转导特性, 探索将乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease, TR)导入肝细胞的新途径.

方法: 将TR基因克隆入含TatPTD的pTAT原核表达载体, 在大肠杆菌BL21(DE3)LysS 内诱导融合蛋白表达并进行纯化. 将纯化的Tat-TR加入培养的HepG2细胞, 间接免疫荧光法检测其导入HepG2细胞的效率, MTT法检测其对细胞生长代谢的影响. 将Tat-TR加入培养的HepG2.2.15细胞, 定量PCR法检测HBV DNA水平并以SPSS软件进行统计分析. 将Tat-TR经尾静脉注入小鼠体内2 h后, 对小鼠肝组织进行免疫组化染色, 检测TatPTD能否在体内介导TR进入肝细胞.

结果: 成功地制备了Tat-TR融合蛋白, 其纯度为90%. 间接免疫荧光及MTT的检测结果证实Tat-TR可以跨膜导入HepG2细胞且对细胞生长没有影响. SPSS统计分析显示Tat-TR可以抑制HBV的复制. 免疫组化染色结果显示, TatPTD在体内也可以介导TR进入肝细胞.

结论: Tat-HBV靶向核糖核酸酶的制备及活性鉴定, 为应用靶向核糖核酸酶治疗乙肝病毒感染的研究奠定了良好的基础.

Keywords: HIV-Tat蛋白转导域; 肝细胞; 核糖核酸酶