修回日期: 2004-12-11
接受日期: 2004-12-28
在线出版日期: 2005-02-15
目的: 探讨加味左金丸三种组成中药的主要单体成分小檗碱、吴茱萸碱和靛玉红对人胃癌细胞生长抑制、诱导凋亡和细胞
周期的影响.
方法: 人胃癌细胞株为低分化黏液腺癌MGC803细胞; 小檗碱、吴茱萸碱和靛玉红购自中国药品与生物制品检定所. 苔盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率和凋亡率, 流式细胞技术进行细胞周期、凋亡百分比分析, 甲基绿-派诺宁联合染色法观测凋亡形态, 琼脂糖凝胶电泳分析DNA损伤情况.
结果: 96 h内小檗碱、吴茱萸碱各组细胞存活率不断下降, 其中48 h存活率对照组为100.0±7.9%, 小檗碱4 mg/L和8 mg/L组分别为72.9±6.2%(t = 4.67, P<0.01)和17.4±4.8%(t = 15.48, P<0.001), 吴茱萸碱1 mg/L和5 mg/L组分别为37.8±5.7%(t = 11.06, P<0.001)和10.7±11.1%(t = 11.35, P<0.001); 各组均与对照组比较(n = 3); 对生长的抑制作用呈时间、药物浓度依赖性. 甲基绿-派诺宁原位染色, 细胞表现出凋亡特征. 小檗碱与吴茱萸碱组脱落的悬浮死细胞中有较高比例胞膜完整、抗拒苔盼蓝和酚红染色的凋亡细胞, 其中48 h凋亡率对照组为0.3±0.0%, 小檗碱8 mg/L组为65.2±9.5%(t = 11.83, P<0.001); 吴茱萸碱1 mg/L组为58.9±11.4%(t = 8.90, P<0.001), 而阿霉素组脱落死细胞不能抗拒苔盼蓝和酚红染色. 流式细胞仪检测表明小檗碱与吴茱萸碱组均出现亚二倍体凋亡峰; 细胞周期分别阻滞于G0-G1、G2期; 凋亡百分比与对照组11.8±2.5比较, 小檗碱4 mg/L组48 h为18.9±2.7(t = 3.34, P<0.05), 72 h为23.9±3.3(t = 5.06, P<0.01), 吴茱萸碱1 mg/L组72 h为16.6±1.6(t = 2.80, P<0.05). 琼脂糖凝胶电泳表明, 小檗碱组DNA裂成大片段, 吴茱萸碱组和阿霉素组DNA断裂呈涂抹状. 靛玉红各组对细胞生长、凋亡无影响, DNA无损伤.
结论: 小檗碱与吴茱萸碱均能诱导人胃癌细胞凋亡, 且作用较阿霉素温和; 靛玉红对胃癌细胞的体外作用不明显.