基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-02-15; 13(4): 460-463
Published online 2005-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i4.460
诱导型一氧化氮合酶基因启动子在不同细胞系中的转录活性
郭风劲, 成军, 纪冬, 刘妍, 王琳, 张黎颖, 戴久增, 宋方洲
郭风劲, 重庆医科大学生物学教研室 重庆市 400016
郭风劲, 成军, 纪冬, 刘妍, 王琳, 张黎颖, 戴久增, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
宋方洲, 重庆医科大学分子生物学教研室, 重庆市 400016
郭风劲, 女, 1972-9-19生, 重庆市人, 汉族, 1994年兰州大学细胞生物学学士, 2003年重庆医科大学临床检验与诊断学博士, 从事多基因病的分子生物学研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30371288; 北京市自然科学基金资助项目, No. 5042024; 国家人事部第35批博士后科学基金资助项目, No. 2004035045.
通讯作者: 成军, 100011, 北京市东城区安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真: 010-64281540
收稿日期: 2004-12-13
修回日期: 2004-12-19
接受日期: 2004-12-21
在线出版日期: 2005-02-15
Abstract

目的: 探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别.

方法: 利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp), 聚合酶链反应(PCR)扩增iNOSp, 克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中, 构建pCAT3-iNOSp报告载体; 以该质粒分别转染正常人肝细胞株L02, 人肝母细胞瘤细胞系HepG2, 小鼠成纤维细胞NIH-3T3, 人贮脂细胞(Lipocyte Ito Cell)和肝癌细胞株SMMC-7721, 用ELISA法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)在不同细胞系中的表达活性.

结果: 成功获得iNOS基因启动子的正确克隆, 克隆的iNOS启动子有顺式激活下游基因的活性. pCAT3-iNOSp瞬时转染HepG2细胞的CAT表达活性最强, 肝贮脂细胞Ito中CAT表达活性最弱.

结论: 不同细胞中iNOS启动子的表达活性不同, 其表达活性与细胞类型与细胞状态密切相关.

Keywords: 诱导型一氧化氮合酶; 转录; 聚合酶链反应; ELISA法