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胃肠道间质瘤c-kit基因突变体的研究
刘晓红, 中国人民解放军第二军医大学长海医院胸心外科 上海市 200433
谢强, 白辰光, 冯菲, 马大烈, 中国人民解放军第二军医大学长海医院病理科 上海市 200433
刘晓红, 女, 1976-09-04生, 山东济宁人, 汉族. 1999年济宁医学院本科毕业, 2002年第二军医大学硕士研究生毕业, 主要从事肿瘤的病理研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 , No. 30070743 .
通讯作者: 马大烈, 200433, 上海市杨浦区长海路187号, 中国人民解放军第二军医大学长海医院病理科. daliema@yahoo.com.cn
电话: 021-25070660 传真: 021-25072135
收稿日期: 2004-09-24
修回日期: 2004-10-22
接受日期: 2004-11-04
在线出版日期: 2005-02-01
修回日期: 2004-10-22
接受日期: 2004-11-04
在线出版日期: 2005-02-01
Abstract
目的: 研究突变型c-kit基因对细胞增生及细胞周期的影响从而揭示突变型c-kit基因对人体细胞的恶性转化作用.
方法: 将构建于pcDNA3的突变型c-kit cDNA和野生型c-kit cDNA重组质粒及空白pcDNA3质粒(空白对照)通过脂质体法稳定转染人胚胎肾细胞(human embryonic kidney cell, HEK)细胞. 用Western blot方法检测c-kit蛋白的表达情况, 观测转染细胞的生长曲线变化, 用MTT法检测细胞增生活性的变化, 并用流式细胞仪检测c-kit基因突变体对细胞周期的影响.
结果: 与阴性对照、空白对照相比, 实验组细胞生长速度明显增快, 细胞增生活性明显增强, 细胞周期检测显示: 实验组和阳性对照组处于增生期细胞(S+G2-M)比例明显高于阴性对照组和空白对照组, 各组处于增生期的细胞比例依次为: 48.34%(实验组)、48.24%(阳性对照组)、42.03%(阴性对照组)、42.16%(空白对照组).
结论: c-kit基因突变可使人类细胞的增生活性明显增强, 并可以使更多的细胞由静止期进入增生期, 提示c-kit基因突变有可能是引起GIST的恶性转化的关键机制之一.
Keywords: 突变c-kit基因; 胃肠道间质瘤; 流式细胞术; MTT法