基础研究
Copyright ©The Author(s) 2005. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2005-11-15; 13(21): 2530-2534
Published online 2005-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i21.2530
应用载体介导的 RNAi 技术抑制人胃癌和腹膜间皮细胞中TGF-β1 的表达
吴涛, 徐惠绵, 吴晓华, 姜成钢, 于淼
吴涛, 徐惠绵, 姜成钢, 于淼, 中国医科大学附属第一医院肿瘤科 辽宁省沈阳市 110001
吴晓华, 秦皇岛市第一医院普外科 河北省秦皇岛市 060000
吴涛, 男, 1972-09-08生, 辽宁省丹东市人, 2003年中国医科大学博士生, 主治医师, 主要从事胃肠道肿瘤侵袭、转移的研究.
基金项目: 国家重点基础研究发展规划973项目资助, No. G1998051203; 辽宁省自然科学基金资助, No. 2001225002-3.
通讯作者: 徐惠绵, 110001, 辽宁省沈阳市和平区南京北街155号, 中国医科大学附属第一医院肿瘤科. xuhuimian@126.com
电话: 024-23256666-6227
收稿日期: 2005-08-03
修回日期: 2005-08-20
接受日期: 2005-08-26
在线出版日期: 2005-11-15
Abstract

目的: 应用载体介导的RNAi技术特异地干扰TGF-β1在人胃癌细胞株SGC-7901和腹膜间皮细胞中的表达.

方法: 使用线性化的pcPUR β iCassette质粒构建针对TGF-β1基因的siRNA表达载体; hU6载体启动子下游插入含TGF-β1基因特异性序列的62 mer寡核苷酸片段; 采用胰蛋白酶-EDTA消化法, 从人的腹膜组织中分离腹膜间皮细胞. 采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法对培养细胞进行鉴定. 将TGF-β1-siRNA载体转染人的上述两种细胞, 以半定量RT-PCR和Western印迹方法检测转染后两种细胞中TGF-β1的表达水平的变化.

结果: 电泳、DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已准确克隆入pcPUR β iCassette载体. 免疫组化染色结果显示腹膜间皮细胞角蛋白, 波形蛋白表达阳性, 而白细胞共同抗原(CD45), 第Ⅷ因子相关抗原阴性. 与各自未处理组比较, 两种细胞TGF-β1-siRNA载体组的mRNA和蛋白均明显下降, 并以蛋白下降更为明显. 人胃癌细胞株SGC-7901 TGF-β1蛋白下降约65.8%, 人腹膜间皮细胞TGF-β1蛋白下降约61.8%.

结论: 载体介导的RNAi技术可成功地干扰TGF-β1在人胃癌细胞株SGC-7901和腹膜间皮细胞中的表达, 为今后胃癌腹膜转移的基因靶向治疗奠定了基础.

Keywords: 载体介导; RNAi; TGF-β1; 胃癌; 腹膜间皮