Published online 2005-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i16.1959
修回日期: 2005-06-01
接受日期: 2005-06-15
在线出版日期: 2005-08-28
目的: 构建表达单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV1-tk)的重组逆转录病毒, 建立HSV1-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统并检测其对小鼠肝癌细胞H22移植瘤的抑制效应.
方法: 构建携带HSV1-tk基因的逆转录病毒载体pLXSN-tk, 用PolyFect Transfection试剂介导重组逆转录病毒转染入包装细胞系PT67, 通过G418筛选建立稳定产病毒的细胞株, 将该重组逆转录病毒感染小鼠肝癌细胞H22, 以G 418筛选的抗性克隆(命名为H22/tk); 将H22/tk细胞与未经基因修饰的H22细胞按1∶4混合接种小鼠皮下, 联合应用GCV, 观察其抑瘤作用(n = 19).
结果: 经酶切鉴定和DNA序列测定, 证明HSV1-tk基因成功定向插入到pLXSN逆转录病毒载体中; 重组病毒DNA转染包装细胞PT67, 获取病毒滴度为4×107cfu/L的重组逆转录病毒培养液; 感染小鼠肝癌细胞H22后再筛选出G418抗性克隆株H22/tk. H22/tk细胞与H22细胞混合所致荷瘤鼠在GCV治疗前, 各组间肿瘤体积无显著性差异; GCV治疗后, 与对照组相比, GCV治疗组肿瘤的生长明显受到抑制, 到第8, 10, 12, 14 d, 致瘤模型对照组的肿瘤体积分别为356±205, 635±382, 963±580, 1 509±1 105 mm3, 而GCV治疗组分别为231±155 (vs对照组, t = -2.25, P = 0.03), 413±252 (vs对照组, t = -2.14, P = 0.04), 592±420 (vs对照组, t = -2.38, P = 0.02), 939±847 mm3(vs对照组, t = -1.92, P = 0.06), GCV治疗组的肿瘤生长抑制率分别为35.0%, 35.0%, 38.5%, 37.8%.
结论: 成功获取表达HSV1-tk基因的逆转录病毒, 已建立显示出体内抑瘤活性的自杀基因治疗系统, 为进一步研究中医药对自杀基因抗肿瘤的增效作用奠定基础.