研究快报
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世界华人消化杂志. 2005-07-15; 13(13): 1612-1614
Published online 2005-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i13.1612
乙型肝炎病毒前-X在大肠杆菌中的表达和纯化
王春花, 成军, 郎振为, 李蕴茹, 闫杰, 张黎颖
王春花, 成军, 李蕴茹, 闫杰, 张黎颖, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
郎振为, 北京地坛医院病理科 北京市 100011
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100011, 北京市东城区安定门外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真: 010-64281540
收稿日期: 2005-01-10
修回日期: 2005-05-20
接受日期: 2005-05-25
在线出版日期: 2005-07-15
Abstract

目的: 在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白，并进行纯化和鉴定.

方法: 通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-X基因，将前-X克隆至PET32a+，构建原核表达重组质粒，在大肠杆菌中诱导表达，表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot.

结果: 成功扩增获得HBV的前-X编码基因片断，并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导，裂解，SDS-PAGE，结果显示得到了目的蛋白Mr27 000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验，结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.

结论: 成功表达HBV的前-X蛋白，对于研究HBV的前-X蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础.

Keywords: N/A