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世界华人消化杂志. 2005-07-15; 13(13): 1558-1561
Published online 2005-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i13.1558
Published online 2005-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i13.1558
人谷氧还蛋白基因的分子克隆及表达
张春晶, 于海涛, 齐齐哈尔医学院生化教研室 黑龙江省齐齐哈尔市 161042
周宏博, 邹朝霞, 董钦, 哈尔滨医科大学生化教研室 黑龙江省哈尔滨市 150086
张春晶, 女, 1973年生, 黑龙江省齐齐哈尔人, 硕士, 主要从事生物化学与分子生物学方面的研究.
基金项目: 黑龙江省自然基金资助项目 , No. D2004-05 .
通讯作者: 周宏博, 150086, 黑龙江省哈尔滨市南岗区保健路157号, 哈尔滨医科大学生化教研室. zhouhongbo6704@yahoo.com.cn
电话: 0451-86671684
收稿日期: 2005-04-15
修回日期: 2005-04-28
接受日期: 2005-05-06
在线出版日期: 2005-07-15
修回日期: 2005-04-28
接受日期: 2005-05-06
在线出版日期: 2005-07-15
Abstract
目的: 克隆人脐静脉内皮细胞谷氧还蛋白(glutaredoxin, Grx)编码区的cDNA序列并进行序列测定, 构建原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.
方法: 从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA, 采用RT-PCR技术, 获得该基因编码区的cDNA, 并重组入原核克隆表达载体pRSETA, 构建重组质粒pRSET-Grx, 通过菌落PCR筛选及限制性内切酶鉴定, 选择阳性克隆并测序.将测序正确的重组质粒pRSET-Grx转化大肠杆菌BL21(DE3), 用IPTG诱导表达.
结果: 将所得序列与GenBank提供的序列(NM002064)比较, 测出的序列在核苷酸序列上有一处碱基不同, 但在氨基酸序列上与已知序列一致.经IPTG诱导4-5 h后, 150 g/L SDS-PAGE 分析, 表达出Mr16000的蛋白.
结论: 从人脐静脉内皮细胞中成功地获得Grx编码区的cDNA, 成功构建了原核融合表达载体pRSET-Grx并获得表达.
Keywords: 分子克隆; 谷氧还蛋白; 人脐静脉内皮细胞