胃癌
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世界华人消化杂志. 2005-07-15; 13(13): 1493-1498
Published online 2005-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i13.1493
人胃癌细胞肿瘤相关基因的表达与甲基化调控
杨丽, 朱红音, 程中华, 陆嵘, 陈萦晅, 房静远
杨丽, 同济大学附属同济医院消化科 上海市 200065
朱红音, 程中华, 陆嵘, 陈萦晅, 房静远, 上海第二医科大学附属仁济医院消化疾病研究所 上海市 200001
杨丽, 女, 1973-11-16生, 山东省肥城市人, 汉族. 2003年上海第二医科大学硕士.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30170413.
通讯作者: 房静远, 200001, 上海市山东中路145号, 上海第二医科大学附属仁济医院消化疾病研究所. jingyuanfang@yahoo.com
电话: 021-63200874 传真: 021-63266027
收稿日期: 2005-01-24
修回日期: 2005-02-17
接受日期: 2005-02-26
在线出版日期: 2005-07-15
Abstract

目的: 旨在阐明胃癌的发生中多种抑癌基因和癌基因的甲基化情况, 以期为进一步深入探索通过改变抑癌基因的甲基化而为胃癌治疗提供新方法.

方法: 培养人胃癌细胞株MKN-45和HGC-27两种细胞,在MTT确定去甲基化制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)浓度和时间对细胞生长活力没有影响后, 分别以2, 5, 和10 μmol/L浓度分别干预24和72 h,然后提取其DNA和RNA,用RT-PCR的方法检测p16INK4A, p21WAF1, p53, c-Ha-ras和c-myc等多种基因的表达情况; 同时以流式细胞仪分析药物干预后的MKN-45和HGC-27的细胞周期变化; DNA分析则通过亚硫酸氢盐修饰和测序和甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测p16INK4A基因及c-myc启动子区甲基化的情况.

结果: 我们所采用的5-aza-dC的浓度和时间对细胞的生长无显著性影响.5-aza-dC干预前, MKN-45和HGC-27两种胃癌细胞系中均有p16INK4A表达, 5-aza-dC干预后在MKN-45 和HGC-27两种胃癌细胞系中p16INK4A的表达增强,且不同的胃癌细胞株表达增强最明显时的时间与浓度不同.p53, p21WAF1, c-myc, c-Ha-ras等多种基因在干预前后均有表达,且在干预前后无明显变化.在5-aza-dC干预后, HGC-27细胞周期阻滞在G1期, 而MKN-45细胞的周期无明显改变.p16INK4A启动子区存在甲基化使得该基因的表达减少, 在去甲基化试剂处理后使其表达增强.

结论: 人胃癌细胞系MKN-45和HGC-27中, p16INK4A启动子甲基化是其在表达减弱的主要原因, 其去甲基化程度取决于5-aza-dC干预的时间和浓度.

Keywords: 甲基化; 抑癌基因; 癌基因; 胃癌