基础研究
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世界华人消化杂志. 2004-06-15; 12(6): 1337-1340
Published online 2004-06-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i6.1337
永生大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
潘勤, 李定国, 汪余勤, 徐芹芳
潘勤, 李定国, 汪余勤, 徐芹芳, 上海第二医科大学附属新华医院消化内科 上海市 200092
潘勤, 男, 1971-03-12生, 上海市人, 汉族. 2003年获上海第二医科大学博士学位. 主要研究方向为肝纤维化的发生机制及药物防治.
基金项目: 上海市科委基金资助项目, No. 004119047.
通讯作者: 潘勤, 200092, 上海市控江路1665号, 上海第二医科大学附属新华医院. fangchunhua@online.sh.cn
电话: 021-65790000-5319 传真: 021-55571294
收稿日期: 2003-12-29
修回日期: 2004-02-09
接受日期: 2004-02-24
在线出版日期: 2004-06-15
Abstract

目的: 建立永生性大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)系.

方法: 采用改良胶原酶原位灌注法消化肝脏, 经Nycodenz密度梯度离心分离、鉴定成年Sprague-Dawley大鼠的HSC. 然后通过细胞克隆建立HSC系(HSC-PQ)并传代培养. 结合细胞动力学、光镜、透射电镜及免疫细胞化学技术检测HSC-PQ系的倍增时间、a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, a-SMA)及结蛋白表达、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)合成等表型特征.

结果: 分离获得的HSC约为2×107细胞/只大鼠, 细胞成活率>95%, 纯度>90%, 培养2 wk后几乎所有HSC均已活化. 在此基础上经细胞克隆所得的HSC-PQ系表型类似成纤维细胞, 倍增时间约75 h, 可表达结蛋白、a-SMA以及除IV型胶原外的多种ECM成分(I型胶原、III型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等), 且传代过程中增生、ECM表达等特性均保持稳定. 该细胞系已在体外培养32代(1年以上), 提示其具有永生性.

结论: 已成功建立永生性大鼠HSC系, 该细胞系的基本特征与活化的原代HSC相似.

Keywords: N/A