病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-04-15; 12(4): 821-823
Published online 2004-04-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i4.821
基因表达谱芯片技术筛选肝再生增强因子反式调节基因
王琳, 李克, 成军, 张健, 邵清, 刘敏
王琳, 李克, 成军, 张健, 邵清, 刘敏, 中国人民解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
王琳, 女, 实验技师. 主要从事肝炎病毒蛋白结合蛋白和分子生物学调节机制的研究.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-11-13
修回日期: 2003-12-01
接受日期: 2003-12-16
在线出版日期: 2004-04-15
Abstract

目的: 为了阐明人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration, ALR)的表达对于肝细胞基因表达谱的影响, 我们应用基因芯片技术, 对于转染和未转染的HepG2细胞进行了分析.

方法: 从HepG2细胞RNA中用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)扩增出ALR编码区DNA, 常规分子生物学技术构建ALR的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ALR, 利用脂质体转染技术转染HepG2细胞, ALR的表达以 Western blot杂交技术证实. 从转染和非转染细胞HepG2种提取总mRNA, 逆转录为cDNA, 并进行基因芯片技术分析.

结果: 经过限制性内切酶分析和序列测定, 证实pcDNA3.1(-)-ALR构建正确. ALR在HepG2细胞中的表达以Western blot杂交技术得到证实. 对于ALR重组表达载体和空白载体转染的HepG2细胞的基因表达谱, 利用基因芯片技术进行分析. 结果表明, 2种基因的表达水平上调, 24种基因的表达水平下调. 这些基因包括淀粉酶、肿瘤坏死因子受体、金属蛋白酶1组织抑制因子、性激素相关蛋白等基因, 相信这些类型的基因在ALR所发挥的生物学效应起到重要的作用.

结论: ALR对于肝细胞基因表达谱存在一定影响; 基因芯片技术是分析蛋白反式调节基因表达谱的重要技术途径, 有助于了解ALR对肝细胞和其他生物学功能的调节作用.

Keywords: N/A