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人肝素酶基因正反义腺病毒表达载体的构建及鉴定
蔡永国, 房殿春, 杨仕明, 罗元辉, 杨孟华, 王东旭, 中国人民解放军第三军医大学西南医院全军消化中心 重庆市 400038
蔡永国, 男, 1970-11-11生, 山东沂水人, 汉族. 博士研究生, 发表论文6篇, 主要从事消化道肿瘤的研究
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 , No. 30200123 .
通讯作者: 杨仕明, 400038, 重庆市, 中国人民解放军第三军医大学附属西南医院全军消化专科中心. shimingyang@yahoo.com
电话: 023-68754000-73057
收稿日期: 2003-08-08
修回日期: 2003-09-10
接受日期: 2003-09-24
在线出版日期: 2004-02-15
修回日期: 2003-09-10
接受日期: 2003-09-24
在线出版日期: 2004-02-15
Abstract
目的: 构建人肝素酶正义和反义腺病毒表达载体.
方法: 用EcoR Ⅰ从pcDNA3-hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段, 然后连入pDC315质粒的EcoRⅠ酶切位点上, 经BamH Ⅰ酶切鉴定出正义和反义表达载体, 并对正义重组质粒进一步采用测序鉴定其方向性.
结果: 经BamH Ⅰ酶切后, 正义质粒形成4.3 + 1.4 kb两条带, 而反义重组质粒为5.1 + 0.4 kb两条带, 与理论计算值完全一致; 测序结果与Gene Bank报告的肝素酶序列完全一致.
结论: 成功构建了人肝素酶的正、反义腺病毒表达载体, 为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肿瘤细胞的影响奠定了基础.
Keywords: N/A