病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-02-15; 12(2): 315-318
Published online 2004-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i2.315
HCV包膜糖蛋白E2基因的克隆、蛋白表达及纯化
杜德伟, 贾战生, 秦鸿雁, 刘秋平, 周永兴, 韩骅
杜德伟, 贾战生, 刘秋平, 周永兴, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心 陕西省西安市 710038
秦鸿雁, 韩骅, 中国人民解放军第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室 陕西省西安市 710032
杜德伟, 男, 1966-08-30生, 吉林德惠市人, 汉族. 1989年第四军医大学本科毕业, 2001年第四军医大学硕士研究生毕业, 医学博士研究生, 主治医师, 讲师, 主要从事病毒性肝炎致病机制及基因治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 30070687.
通讯作者: 贾战生, 710038, 陕西省西安市灞桥区新医路1号, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心. jiazsh@fmmu.edu.cn
电话: 029-3377742
收稿日期: 2003-10-15
修回日期: 2003-10-25
接受日期: 2003-11-19
在线出版日期: 2004-02-15
Abstract

目的: 获得大量重组HCVE2蛋白, 为研究E2蛋白的功能及制备其抗体奠定基础.

方法: 利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出 831 bp(384-661 aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+)上, 得到重组质粒pET32a-HCVE2, 转化大肠杆菌BL-21 (DE3)菌株, IPTG诱导HCV E2蛋白表达, SDS-PAGE 和Western blot检测蛋白表达, Ni-NTA偶联的琼脂糖黏附柱纯化融合蛋白.

结果: 经IPTG诱导后, 可见分子量约55 000的融合蛋白表达; 表达的蛋白主要以包涵体形式存在; 经Ni-NTA偶联的琼脂糖黏附柱纯化的融合蛋白与抗His抗体及HCV阳性血清具有良好的反应原性.

结论: HCV E2基因的克隆、表达及其融合蛋白的纯化为进一步开展HCV E2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础.

Keywords: N/A